阿魏酸鈉聯(lián)合苦參素用藥的抗?jié)B出作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　研究阿魏酸鈉（sodium ferulate，SF）和苦參素（oxymatrine，OMT）的協(xié)同抗?jié)B出作用及其作用機(jī)制。
　　方法：
　　1．采用冰醋酸誘導(dǎo)的小鼠腹膜炎模型，研究SF和OMT聯(lián)合用藥的體內(nèi)抗?jié)B出作用，并計(jì)算抑制率和ID50值。
　　2．采用顯微鏡分析法、ELISA法，研究SF和OMT聯(lián)合用藥對小鼠腹腔灌洗液中的白細(xì)胞數(shù)、白介素-6（interleukin-6，IL-6）、C-反應(yīng)蛋白

2、（C-reactive protein， CRP）和γ干擾素(Interferon-γ，IFN-γ)的影響。
　　3．小鼠大網(wǎng)膜HE染色，研究SF和OMT聯(lián)合用藥對大網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)和血管完整性的影響。
　　4．采用流式細(xì)胞儀檢測SF和OMT聯(lián)合用藥對冰醋酸誘導(dǎo)的人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（Human Umbilical Vein Endothelial Cells，HUVEC）體積的影響。
　　5．采用水通道蛋白1（a

3、quaporins1，AQP1）抗原免疫組化染色，研究SF和OMT聯(lián)合用藥對小鼠大網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞及HUVEC細(xì)胞AQP1蛋白的表達(dá)的影響。
　　6．采用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)，研究SF和OMT聯(lián)合用藥對白細(xì)胞遷移的影響。
　　結(jié)果：
　　1．冰醋酸誘導(dǎo)的小鼠腹膜炎模型顯示，SF或OMT單獨(dú)給藥組劑量大于62.5 mg/kg時(shí)，其腹腔滲出液的OD值比模型組降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，顯示一定的抗?jié)B出作用。SF單獨(dú)給藥組ID50值為37

4、2 mg/kg，最大抑制率為37.7％；OMT單獨(dú)給藥組ID50值為310.3 mg/kg，最大抑制率為41.9%。然而，SF和OMT聯(lián)合用藥劑量大于31.3 mg/kg（SF+OMT：9.7+21.6 mg/kg）時(shí)，即表現(xiàn)抗?jié)B出作用，且呈劑量依賴性。SF和OMT聯(lián)合用藥組ID50值46.5+104.1 mg/kg，最大抑制率為59.7%，其作用明顯優(yōu)于SF和OMT的單方給藥組。等效應(yīng)線分析表明，聯(lián)合用藥對抑制腹腔液的滲出有協(xié)同作用。

5、
　　2．顯微鏡細(xì)胞計(jì)數(shù)分析結(jié)果表明，與模型組相比，SF和OMT聯(lián)合用藥能夠顯著性降低腹腔灌洗液中白細(xì)胞數(shù)（P<0.05，P<0.01），抑制率高達(dá)72.6%。與模型組比較，OMT單獨(dú)給藥（43.1 mg/kg）能夠顯著降低腹腔灌洗液中白細(xì)胞數(shù)（P<0.05）；SF單獨(dú)給藥（19.4 mg/kg）對腹腔灌洗液中白細(xì)胞數(shù)未見顯著性變化。腹腔灌洗液的ELISA分析結(jié)果表明，與模型組比較，SF和OMT聯(lián)合用藥能夠顯著性降低IL-6、CR

6、P和IFN-γ水平（P<0.05，P<0.01），且低、中、高三個(gè)劑量呈劑量依賴關(guān)系。與模型組比較，OMT單獨(dú)給藥組（43.1 mg/kg）能夠顯著降低IL-6、CRP和IFN-γ水平（P<0.05）；而SF單獨(dú)給藥組（19.4 mg/kg）對IL-6、CRP和IFN-γ水平未見顯著變化。
　　3．病理組織學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，SF單獨(dú)用藥組（19.4 mg/kg）對小鼠大網(wǎng)膜血管內(nèi)皮的損傷評分與模型組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；OMT單獨(dú)用藥組（4

7、3.1 mg/kg）、SF和OMT聯(lián)合用藥組能夠顯著改善小鼠大網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷（P<0.05，P<0.01）。
　　4．流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果表明，SF和OMT聯(lián)合用藥能夠明顯降低向前散射（Forward Scatter，F(xiàn)SC-A）（模型組：17.8±0.04，SF+OMT高、中、低劑量分別為：4.6±0.02、5.5±0.08和9.6±0.07；P<0.05，P<0.01）和側(cè)向散射（Side Scatter，SSC-A）值

8、（模型組：42.7±0.15，SF+OMT高、中、低劑量分別為：9.7±0.06、13.2±0.08和21.4±0.13；P<0.05，P<0.01）；OMT（200μmol/L）單組給藥組亦能顯著降低FSC-A和SSC-A值，而SF（100μmol/L）單獨(dú)給藥組的FSC-A和SSC-A值與模型組比較未見明顯變化。
　　5．AQP1抗原免疫組化染色結(jié)果表明，AQP1蛋白在小鼠大網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞表面表達(dá)，呈棕黃色。與模型組比較，S

9、F和OMT聯(lián)合用藥組能夠顯著增加AQP1在小鼠大網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞及HUVEC的表達(dá)（P<0.05，P<0.01）且呈劑量依賴關(guān)系，等同劑量的單獨(dú)用藥對小鼠大網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞的AQP1蛋白表達(dá)未見顯著影響。與模型組比較，SF和OMT聯(lián)合用藥組在濃度達(dá)到50+100μmol/L時(shí)，顯著增加HUVEC細(xì)胞AQP1蛋白表達(dá)（P<0.05，P<0.01）；SF和OMT單獨(dú)給藥組的藥物濃度分別大于200μmol/L和400μmol/L時(shí)，HUVEC

10、細(xì)胞上AQP1蛋白表達(dá)增加也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　6．RAW264.7細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)顯示，SF和OMT聯(lián)合用藥能夠顯著性的降低劃痕區(qū)域的細(xì)胞數(shù)，抑制RAW264.7小鼠巨噬細(xì)胞的遷移，抑制率最大可達(dá)60.2%，明顯高于單獨(dú)用藥（SF組抑制率：21.4%，OMT組抑制率：28.4%）。
　　結(jié)論：
　　阿魏酸鈉和苦參素聯(lián)合用藥對冰醋酸誘導(dǎo)的小鼠腹膜炎有明顯的協(xié)同抗?jié)B出作用，其機(jī)制可能與降低炎癥所致的毛細(xì)血管