農(nóng)業(yè)廢物堆肥中高產(chǎn)漆酶新菌株的篩選鑒定、液態(tài)發(fā)酵及酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf

1、堆肥化在農(nóng)業(yè)廢物的處理中已得到了廣泛的應(yīng)用。木質(zhì)素是農(nóng)業(yè)廢物堆肥過(guò)程中的主要限速有機(jī)物，其降解被認(rèn)為是快速堆肥的關(guān)鍵。漆酶是一種含多個(gè)銅原子的多酚氧化酶，能催化氧化多種芳香族化合物，是木質(zhì)素降解酶系中一員，在木質(zhì)素礦化降解、腐殖質(zhì)形成等過(guò)程中發(fā)揮重要作用。
　　 本研究利用秸稈等原料對(duì)農(nóng)業(yè)廢物堆肥過(guò)程進(jìn)行模擬，從堆肥樣品中分離得到一株產(chǎn)漆酶活力較高的菌株（菌株編號(hào)C2），對(duì)其進(jìn)行了鑒定，并研究了該菌株的發(fā)酵條件、酶的分離純化和性

2、質(zhì)以及漆酶基因。結(jié)論歸納如下:
　　 以愈創(chuàng)木酚被氧化顯色作為檢測(cè)方法，篩選出了一株產(chǎn)漆酶能力強(qiáng)的菌株。通過(guò)對(duì)該菌株培養(yǎng)特征、形態(tài)特征觀察及ITS序列分析，鑒定該菌株屬于哈茨木霉，命名為Hypocrea lixii sp.C2，其ITS序列的GenBank登錄號(hào)為HQ699075。
　　 對(duì)Hypocrea lixii sp.C2的液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)漆酶條件進(jìn)行了優(yōu)化，得到的優(yōu)化培養(yǎng)基為:葡萄搪20 g，尿素2.21 g，KH2

3、PO43 g，MgSO4·7H2O2 g，CuSO40.3 g，加蒸餾水至1000mL，愈創(chuàng)木酚0.05％，pH4.0，30℃培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間4d。以2，2'-聯(lián)氮雙（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二銨鹽(ABTS)為底物時(shí)，優(yōu)化后漆酶酶活可達(dá)200 U·mL-1，約為優(yōu)化前的3倍。
　　 菌株Hypocrea lixii sp.C2液態(tài)發(fā)酵所產(chǎn)的漆酶通過(guò)三氯乙酸-丙酮沉淀、膜過(guò)濾、離子交換層析分離純化后，得到電泳純的漆酶，純化倍

4、數(shù)為13.2，回收率為7.4％。根據(jù)SDS-PAGE電泳，Hypocrea lixii sp.C2漆酶分子量約為60 kDa。純化后的漆酶最適溫度為35℃，最適pH為4.0;在50℃保溫1h能保存80％的酶活，在60℃時(shí)漆酶半衰期＞1 h;金屬離子對(duì)漆酶酶活的影響很大，其中Na+、Fe2+、Fe3+、Pb2+、Zn2+對(duì)酶活有抑制作用，Cu2+對(duì)酶活有促進(jìn)作用;在低濃度時(shí)，K+、Mg2+對(duì)漆酶有激活作用。以ABTS為底物時(shí)，測(cè)定該酶的米