金黃色葡萄球菌對萬古霉素敏感性降低的流行病學(xué)調(diào)查和分子機制研究.pdf

1、目的:逐年分析金黃色葡萄球菌對萬古霉素的MIC值變化情況,評估其萬古霉素MIC漂移趨勢,了解VraSR雙組份系統(tǒng)在金黃色葡萄球菌對萬古霉素敏感性降低中的作用。
　　 方法:收集2007-2009年重慶和廣州地區(qū)四家三甲醫(yī)院臨床分離的MRSA菌株,重慶的醫(yī)院為A院,廣州地區(qū)三家醫(yī)院分別為B院、C院、D院。微量肉湯稀釋法測定萬古霉素MIC,計算MIC50,MIC90,MIC值幾何均數(shù),敏感率及耐藥率,分析其MIC變化趨勢。然后,對M

2、RSA菌株進行PCR檢測vraSR基因,測序分析,并通過genebank的Blast與N315基因組比對分析,了解其基因有無氨基酸突變。另外,體外用低劑量萬古霉素誘導(dǎo)MRSA臨床菌株,對親本菌株及誘導(dǎo)后不同MIC值階段的菌株檢測vraSR基因,分析有無氨基酸突變,行RT-PCR檢測vraSR基因表達量變化。
　　 結(jié)果:2007年至2009年,臨床分離MRSA菌株共779株,其中2007年264株,2008年342株,2009年

3、173株。研究總體對萬古霉素MIC幾何均值為0.911、0.954、0.976μg/ml,呈逐年上升趨勢,(P＜0.001),在各個醫(yī)院中,A院MIC幾何均值分別為1.052、1.06、1.069μg/ml,呈逐年上升趨勢(P＜0.001)。B院MIC幾何均值分別為0.885、0.901、1.006μg/ml,呈逐年上升趨勢(P＜0.001)。C院MIC幾何均值分別為0.915、0.954、0.926μg/ml,無逐年上升趨勢(P＞0.

4、05)。D院MIC幾何均值分別為1.025、1.001、0.865μg/ml,無逐年上升趨勢(P＞0.05)。MRSA菌株均檢測出雙組份系統(tǒng)vraSR基因。1株MIC=2μg/mL的MRSA菌株waR的第59位谷氨酸突變?yōu)樘於彼?。?0株MRSA進行萬古霉素體外誘導(dǎo)實驗,4天后5株菌株MIC值由0.75μg/ml上升為2μg/ml,6天后1株菌株MIC值從2μg/ml上升為4μg/ml,12天后3株株菌株MIC值從2μg/ml上升為4

5、μg/ml,1株菌株MIC值仍為2μg/ml,其余5株MIC值仍為0.75μg/ml。誘導(dǎo)后的不同階段菌株vraSR基因未發(fā)現(xiàn)突變,vraR基因表達量隨MIC值上升而增加。
　　 結(jié)論:總體MRSA菌株的萬古霉素MIC存在漂移趨勢。其中,A院和B院可見漂移趨勢,C院和D院未見漂移趨勢。所有MRSA菌株均檢測出雙組份系統(tǒng)vraSR基因,發(fā)現(xiàn)一例vraR基因突變。在萬古霉素體外誘導(dǎo)下,MRSA對萬古霉素的MIC可由0.75μg/ml