真武湯對大部分腎切除術(shù)所致尿毒癥心肌病小鼠心臟保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的:
　　運(yùn)用ZWT配方顆粒劑按比例混合成ZWT，干預(yù)行大部分腎切除術(shù)的小鼠，與蒸餾水處理的術(shù)后小鼠進(jìn)行對比觀察，了解ZWT對UCM小鼠心臟結(jié)構(gòu)和功能及腎功能的影響，并進(jìn)一步探討其分子生物學(xué)機(jī)制，為深入闡明UCM發(fā)病機(jī)制，發(fā)掘UCM治療靶點(diǎn)，豐富中醫(yī)藥治療UCM的療效機(jī)理提供新思路與新途徑。
　　方法:
　　1.疾病模型的制作:大部分腎切除術(shù)
　　予1％戊巴比妥鈉50mg/kg腹腔注射麻醉小鼠，約2min后，小

2、鼠呈麻醉狀態(tài)，仰臥位固定小鼠，腹部備皮，消毒，鋪巾，沿腹中線切開皮膚，切口長約2cm，用棉簽小心暴露右腎，結(jié)扎右腎腎蒂后切除右腎。小心暴露左腎，切除左腎上級約1/3腎臟組織，明膠海綿壓迫止血，切除左腎下級約1/3腎臟組織，明膠海綿壓迫止血。左腎殘留腎門處約2mm寬腎臟組織。約5min后小心夾除明膠海綿，觀察切口有無滲血，若有滲血換明膠海綿繼續(xù)壓迫，若無則復(fù)位左腎，逐層縫合腹部切口。假手術(shù)組只剝離兩腎腎包膜。注意手術(shù)過程中勿損傷腎上腺。<

3、br>　　2.分組:
　　C57BL/6小鼠隨機(jī)分3組:假手術(shù)組、模型組和ZWT組。
　　3.干預(yù):
　　ZWT組小鼠術(shù)后予ZWT灌胃，假手術(shù)組和模型組小鼠術(shù)后予等量蒸餾水灌胃。
　　4.檢測
　　(1)心臟彩超分別檢測:舒張期左室后壁厚度(LVPWd)、收縮期左室后壁厚度(LVPWs)、舒張期左室內(nèi)徑(LVEDd)、收縮期左室內(nèi)徑(LVESd)、左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)及左室短軸縮短率(LVFS)，評估U

4、CM小鼠心臟功能狀態(tài)及結(jié)構(gòu)改變;
　　(2)心臟組織HE染色觀察UCM小鼠心臟結(jié)構(gòu)變化;
　　(3)運(yùn)用摘眼球取血法收取小鼠血液，離心收集血清使用全自動化生化分析儀檢測血尿素氮(BUN)及血肌酐(Scr);
　　(4) Western blotting檢測心臟組織AMPK/p-AMPK及mTOR/p-mTOR的表達(dá)情況。
　　5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，使用SPSS19.0軟件處理，

5、數(shù)據(jù)行one-wayANOVA，組間兩兩比較方差齊時(shí)采用LSD法，方差不齊時(shí)采用Dunnett's T3法,P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.一般情況
　　整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中，假手術(shù)組小鼠無一死亡，模型組小鼠死亡2只，真武湯組小鼠死亡1只。與假手術(shù)組小鼠相比，模型組及真武湯組小鼠均有活動遲緩、食欲減退、毛發(fā)暗淡等表現(xiàn)，其中模型組小鼠精神狀態(tài)最差。
　　2.檢測結(jié)果
　　2.1 小鼠腎功能

6、指標(biāo)變化
　　模型組小鼠尿素氮較假手術(shù)組明顯升高(P＜0.05)，模型組小鼠血肌酐較假手術(shù)組明顯升高(P＜0.05)，ZWT組小鼠尿素氮較假手術(shù)組明顯升高(P＜0.05)，ZWT組小鼠血肌酐較假手術(shù)組明顯升高(P＜0.05); ZWT組小鼠尿素氮較模型組無明顯變化，ZWT組小鼠血肌酐較模型組無明顯變化。
　　2.2 小鼠體質(zhì)量、心臟質(zhì)量、心臟指數(shù)(HW/BW)變化
　　模型組小鼠體質(zhì)量較假手術(shù)組明顯降低(P＜0.05)

7、，ZWT組小鼠體質(zhì)量較假手術(shù)組明顯降低(P＜0.05)，ZWT組小鼠體質(zhì)量較模型組無明顯變化;模型組小鼠心臟質(zhì)量較假手術(shù)組明顯增加(P＜0.05)，ZWT組小鼠心臟質(zhì)量較模型組明顯降低(P＜0.05)，ZWT組小鼠心臟質(zhì)量較假手術(shù)組無明顯變化;模型組小鼠心臟指數(shù)較假手術(shù)組明顯增加(P＜0.05)，ZWT組小鼠心臟指數(shù)較假手術(shù)組明顯降低(P＜0.05)，ZWT組小鼠心臟指數(shù)較模型組明顯降低(P＜0.05)。
　　2.3 心臟超聲

8、r>　　模型組小鼠LVPWd較假手術(shù)組明顯增大(P＜0.05)，ZWT組小鼠LVPWd較模型組明顯減小(P＜0.05)，ZWT組小鼠LVPWd較假手術(shù)組無明顯變化;模型組小鼠LVPWs較假手術(shù)組明顯增大（P＜0.05），ZWT組小鼠LVPWs較模型組明顯減小(P＜0.05)，ZWT組小鼠LVPWs較模型組明顯減小(P＜0.05);LVEDd，LVEDd，LVEF及LVFS無明顯變化，
　　2.4 心臟組織病理
　　假手術(shù)組小

9、鼠心肌細(xì)胞排列整齊，細(xì)胞核大小均一，胞漿染色均勻，心肌纖維排列整齊;模型組小鼠心肌細(xì)胞肥大，細(xì)胞核增大，形態(tài)不規(guī)則，核仁濃染，胞漿染色加深，心肌纖維增粗，排列紊亂;ZWT組小鼠心肌細(xì)胞病理改變較模型組減輕。
　　2.5 心臟組織Western blotting檢測
　　模型組小鼠與假手術(shù)組相比p-AMPK表達(dá)明顯降低，ZWT組小鼠與模型組相比p-AMPK表達(dá)明顯升高，模型組小鼠與假手術(shù)組相比p-mTOR表達(dá)明顯升高，ZWT組

10、小鼠與模型組相比p-mTOR表達(dá)明顯降低。
　　結(jié)論:
　　1.大部分腎切除術(shù)可使小鼠腎功能惡化，繼而出現(xiàn)心肌細(xì)胞肥大、左室肥厚等尿毒癥心肌病表現(xiàn)，即大部分腎切除術(shù)可用于制作尿毒癥心肌病動物模型，這很大程度上方便了相關(guān)人員對尿毒癥心肌病的研究;
　　2.運(yùn)用真武湯干預(yù)尿毒癥心肌病小鼠后，小鼠心肌細(xì)胞肥大減少，心肌肥厚減輕，說明真武湯可抑制尿毒癥心肌病小鼠的心肌肥厚;
　　3.尿毒癥心肌病小鼠心肌肥厚與AMPK-m