拮抗木霉菌多功能突變株構(gòu)建與功能分析.pdf

1、本文利用REMI技術(shù)構(gòu)建突變株，篩選出具有防病、刺激植物吸收營(yíng)養(yǎng)和修復(fù)環(huán)境等功能的菌株，旨在為創(chuàng)制多功能木霉菌制劑奠定理論和技術(shù)基礎(chǔ)。取得了如下結(jié)果。 1．對(duì)康氏木霉菌T30進(jìn)行了REMI轉(zhuǎn)化，經(jīng)過繼代培養(yǎng)和抗潮霉素穩(wěn)定性測(cè)定，共獲得60個(gè)穩(wěn)定的轉(zhuǎn)化子。對(duì)轉(zhuǎn)化子進(jìn)行了特異性PCR擴(kuò)增。結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)化子均能擴(kuò)增出特異性的潮霉素和氨芐青霉素基因，初步證明外源質(zhì)粒轉(zhuǎn)入到木霉菌T30的基因組內(nèi)。同時(shí)對(duì)部分轉(zhuǎn)化子進(jìn)行了Southern分子

2、雜交，不僅進(jìn)一步證明外源質(zhì)粒已整合到木霉菌。T30基因組，同時(shí)可以獲得外源質(zhì)粒的相對(duì)拷貝數(shù)的信息。 2．研究了綠色木霉菌T23及其轉(zhuǎn)化子的生防機(jī)制。研究發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)化子之間生長(zhǎng)速度的差異較大。篩選出四株對(duì)三種病原菌有較強(qiáng)的抑制作用的轉(zhuǎn)化子H6、J6、K10、L2。在對(duì)鐮刀菌抑制作用主要是通過快速生長(zhǎng)占領(lǐng)生長(zhǎng)空間和營(yíng)養(yǎng)來源，試驗(yàn)中沒有觀察到覆蓋鐮刀菌的現(xiàn)象，因此，可以認(rèn)為轉(zhuǎn)化子對(duì)黃瓜及甜瓜尖孢鐮刀菌不存在重寄生作用。而對(duì)茄絲核菌和萵苣菌

3、核菌則表現(xiàn)為明顯的重寄生作用，顯微觀察可以看到轉(zhuǎn)化子對(duì)茄絲核菌和萵苣菌核菌的纏繞附著寄生生長(zhǎng)的現(xiàn)象。 選擇了3個(gè)轉(zhuǎn)化子H6、J6、K10進(jìn)行了黃瓜枯萎病的防治實(shí)驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果表明，不同木霉菌轉(zhuǎn)化子對(duì)黃瓜枯萎病防效明顯不同。轉(zhuǎn)化子H6、J6、K10對(duì)黃瓜枯萎病的防治效果優(yōu)于野生菌株T23，分別為61.5％，60.5％和70.2％，而出發(fā)菌的相對(duì)防效為30.76％。 3．明確了T30及其轉(zhuǎn)化子可降解有機(jī)磷農(nóng)藥敵敵畏。結(jié)果表明，

4、轉(zhuǎn)化子對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥敵敵畏都有一定的降解能力，其中TK-3的降解效率較高為98％。轉(zhuǎn)化子降解有機(jī)磷農(nóng)藥效率與葡萄糖劑量、敵敵畏初始濃度、初始pH值關(guān)系密切。轉(zhuǎn)化子降解敵敵畏的葡萄糖最佳濃度為100μg/ml，最適pH值為7.0，木霉菌能降解500μg/ml的敵敵畏，敵敵畏濃度過高則對(duì)木霉菌產(chǎn)生毒害而使其降解率下降。 4．比較分析了T30及其轉(zhuǎn)化子間的解磷能力。研究表明，不同轉(zhuǎn)化子對(duì)難溶性磷酸鹽的溶解能力不同，其中，木霉菌T30的轉(zhuǎn)

5、化子TK-46對(duì)磷酸氫鈣的溶磷能力最強(qiáng)，對(duì)磷酸氫鈣的溶磷量達(dá)到363.7μg/ml，而出發(fā)菌T30為258.72μg/ml。復(fù)篩的三株轉(zhuǎn)化子對(duì)磷酸氫鈣的溶磷量都達(dá)到了350μg/ml以上，對(duì)磷酸鋁的溶磷量也都達(dá)到了30μg/ml以上，對(duì)磷酸鐵沒有溶解能力。優(yōu)勢(shì)溶磷菌株TK-46溶解磷酸氫鈣的最適碳源為蔗糖，最適氮源為氯化銨，溶解磷酸鋁的最適碳源為麥芽糖，最適氮源為硫酸銨。幾種碳源對(duì)轉(zhuǎn)化子溶磷的影響較小，而幾種氮源的影響卻較大，轉(zhuǎn)化子較易

6、利用氨態(tài)氮，不易利用硝態(tài)氮。研究了pH值對(duì)轉(zhuǎn)化子溶磷的影響。pH值變化與解磷機(jī)制關(guān)系有待于進(jìn)一步研究。 5．在接種彎孢菌條件下，研究了木霉菌對(duì)玉米蛋白質(zhì)組差異的影響。研究發(fā)現(xiàn)，木霉菌T23誘導(dǎo)根系可引起玉米葉片差異蛋白的變化。經(jīng)過T23處理玉米根系，然后在葉片上接種彎孢菌，結(jié)果發(fā)現(xiàn)了兩個(gè)特異表達(dá)的蛋白點(diǎn)，質(zhì)譜鑒定為干旱誘導(dǎo)蛋白和醛酮變位酶Glyoxalase(Glx 1)。這一結(jié)果說明木霉可能具有系統(tǒng)誘導(dǎo)抗病相關(guān)蛋白表達(dá)的效應(yīng)。