青海血蜱cDNA表達(dá)文庫(kù)的構(gòu)建和“隱藏抗原”基因的篩選、克隆與表達(dá).pdf

1、青海血蜱(Haemaphysalis qinghaiensis)及其傳播的血液原蟲病嚴(yán)重威脅著中國(guó)畜牧業(yè)的發(fā)展.目前對(duì)蜱的防治主要以藥物防治為主.但隨著蜱耐藥性的產(chǎn)生以及環(huán)境污染和藥物殘留等嚴(yán)重公共衛(wèi)生問題的出現(xiàn)迫使人們尋求防治的新途徑.在眾多控制蜱的方法中,免疫學(xué)防制是前景最誘人的方法.該研究采用兩種不同的免疫途徑制備了羊抗青海血蜱唾液腺蛋白陽(yáng)性血清和羊抗青海血蜱唾液蛋白陽(yáng)性血清.應(yīng)用Western Blot方法,將上述兩種血清分別與

2、青海血蜱唾液腺蛋白提取物雜交以進(jìn)行蛋白的差異顯示.結(jié)果表明羊抗青海血蜱唾液腺蛋白陽(yáng)性血清能識(shí)別青海血蜱唾液腺更多的蛋白帶.這些差異蛋白的分子量分別為49kDa、35.8kDa、31kDa和23.5kDa.通過制備性電泳,將所發(fā)現(xiàn)的差異條帶切取回收并免疫家兔,獲得兔抗青海血蜱差異蛋白陽(yáng)性血清.以半飽血青海血蜱的唾液腺、馬氏管和卵巢等器官為材料,構(gòu)建青海血蜱的cDNA表達(dá)文庫(kù),庫(kù)容量約為2×106pfu/ml.利用兔抗青海血蜱差異蛋白陽(yáng)性血

3、清對(duì)青海血蜱cDNA表達(dá)文庫(kù)進(jìn)行免疫學(xué)篩選,共獲得Hq02、Hq03、Hq04、Hq05和Hq06等5個(gè)陽(yáng)性克隆.經(jīng)鑒定這5個(gè)基因均為青海血蜱所固有的新發(fā)現(xiàn)基因,它們的大小依次為1085bp、726bp、617bp、847bp和1178bp.在大腸桿菌中分別對(duì)Hq02、Hq04和Hq05基因進(jìn)行了表達(dá),利用表達(dá)產(chǎn)物免疫羊所得陽(yáng)性血清能與青海血蜱天然蛋白發(fā)生免疫學(xué)反應(yīng).說明表達(dá)產(chǎn)物具有良好的免疫原性和反應(yīng)原性.這為研制青海血蜱的分子疫苗奠