二氧化硅基納米吸附劑的制備及其親和分離組氨酸標(biāo)記蛋白質(zhì).pdf

1、本文采用SiO2-IDA-Ni2+，NiSiO3，F(xiàn)e3O4@NixSiOy及NiO微納米材料作為親和吸附劑，利用Ni2+與六聚組氨酸的親和作用，對(duì)以六聚組氨酸為標(biāo)簽的蛋白質(zhì)進(jìn)行分離、提純，并結(jié)合多種現(xiàn)代分析手段表征其形貌、結(jié)構(gòu)及性能，評(píng)價(jià)其對(duì)蛋白質(zhì)的分離能力。本論文的主要研究內(nèi)容及結(jié)論如下:
　　(1) SiO2納米微球的制備，功能化及其親和分離His-tagged蛋白
　　以正硅酸乙酯(TEOS)水解的方法制備出粒徑在2

2、00 nm左右的SiO2納米微球，通過環(huán)氧基硅烷偶聯(lián)劑和螯合配體對(duì)其表面進(jìn)行修飾，經(jīng)吸附Ni2+形成SiO2-IDA-Ni2+納米微球，用于分離純化His-tagged融合蛋白。利用SEM、FTIR、TG、BET等分析了納米微球的表面形貌、結(jié)構(gòu)及組成，并用SDS-PAGE對(duì)其分離純化的His-tagged融合蛋白進(jìn)行表征，用BCA蛋白定量試劑盒對(duì)分離的蛋白量進(jìn)行了定量分析。結(jié)果表明，SiO2-IDA-Ni2+復(fù)合微球?qū)is-tagge

3、d蛋白具有良好的分離效果，其吸附量可達(dá)28.3 mg/g。
　　(2)中空NiSiO3納米微球的制備及其親和分離His-tagged蛋白
　　以SiO2納米微球?yàn)槟０?，通過水熱處理得到中空結(jié)構(gòu)的NiSiO3納米微球，采用SEM、HRTEM、XRD和XPS對(duì)樣品的形貌、結(jié)構(gòu)、性能等進(jìn)行系統(tǒng)表征。納米微球內(nèi)外表面具有較多Ni2+位點(diǎn)，可作為親和吸附劑直接用于分離純化His-tagged蛋白質(zhì)，簡化了實(shí)驗(yàn)過程。結(jié)果表明，中空NiS

4、iO3納米微球在分離純化蛋白質(zhì)方面表現(xiàn)出良好的特異性，分離效果甚好，且多次重復(fù)利用之后仍可保持良好的分離效果，具有很好的再生能力。
　　(3) Fe3O4@NixSiOy微球的制備及其親和分離His-tagged蛋白
　　水熱法合成具有磁性的Fe3O4微球，通過溶膠-凝膠法在Fe3O4表面包覆一層SiO2殼層，與NiCl2的堿溶液在高壓釜中反應(yīng)，得到具有層狀殼層的Fe3O4@NixSiOy磁性復(fù)合納米微球。采用SEM、HRT

5、EM、XRD、XPS和VSM對(duì)其形貌、結(jié)構(gòu)和磁性能進(jìn)行了表征，將其用于分離純化His-tagged蛋白質(zhì)，考察了不同條件對(duì)分離效果的影響，并采用SDS-PAGE對(duì)所分離的蛋白進(jìn)行了分析。實(shí)驗(yàn)證明，將Fe3O4@NixSiOy納米微球用于分離純化蛋白質(zhì)，在外加磁場作用下，加快了分離速度，且分離效果良好。
　　(4) NiO的制備及其親和分離His-tagged蛋白質(zhì)
　　采用水熱法合成了表面由納米片垂直排列堆積的NiO微球，考