玉米中黃曲霉毒素的ELISA測(cè)定方法研究.pdf

1、黃曲霉毒素主要是由黃曲霉菌和寄生曲霉菌等多種真菌產(chǎn)生的有毒代謝產(chǎn)物，廣泛存在于糧食谷物和加工食品中，在眾多霉菌毒素中，黃曲霉毒素B1(AFB1)毒性大，致癌力強(qiáng)，理化性質(zhì)穩(wěn)定，對(duì)人類(lèi)健康的危害性極大。AFB1是糧食衛(wèi)生指標(biāo)必檢項(xiàng)目，檢測(cè)機(jī)構(gòu)普遍使用傳統(tǒng)的薄層分析(TLC)國(guó)標(biāo)法來(lái)檢測(cè)AFB1，與液相色譜(HPLC)法相比，TLC方法具有簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)的優(yōu)點(diǎn)，但熒光強(qiáng)度的目測(cè)精確性差;HPLC法具有成本高、檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)、準(zhǔn)確度高的特點(diǎn)，兩者均不

2、適合大批量的樣品的快速檢測(cè)。收獲糧食和庫(kù)存糧食的真菌毒素的檢測(cè)，往往批量大，時(shí)間緊，實(shí)驗(yàn)室一般用酶聯(lián)免疫(ELISA)試劑盒進(jìn)行篩選，由于市供ELISA試劑盒品牌比較多，前處理方法和操作方法也不盡相同，不同的試劑盒存在著測(cè)定結(jié)果方面的偏差。本文就市售真菌毒素ELISA試劑盒進(jìn)行測(cè)試，研究分析試劑盒測(cè)試結(jié)果的穩(wěn)定性、精密度和準(zhǔn)確度，來(lái)選擇試劑盒的應(yīng)用;研究建立了新的ELISA檢測(cè)方法的樣品前處理最優(yōu)參數(shù)，驗(yàn)證了ELISA方法用于谷物中AF

3、B1分析的可行性，并用HPLC重點(diǎn)驗(yàn)證了測(cè)試盒的靈敏度、線性關(guān)系、檢測(cè)重復(fù)性、加標(biāo)回收率等指標(biāo);采用優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)參數(shù)，對(duì)江蘇省2011年南通地區(qū)產(chǎn)新產(chǎn)玉米中AFB1污染狀況進(jìn)行了調(diào)查，研究調(diào)查結(jié)果如下:
　　1、選擇國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上3家真菌毒素ELISA試劑盒進(jìn)行測(cè)試，研究分析3家試劑盒測(cè)試結(jié)果的穩(wěn)定性、精密度和準(zhǔn)確度，結(jié)果表明，C廠家的試劑盒在穩(wěn)定性、精密度和準(zhǔn)確度上的效果最好，故研究中選擇C廠家的試劑盒進(jìn)行應(yīng)用。
　　2、以玉米

4、為試材，研究了不同提取溶液濃度，提取時(shí)間，提取溶液體積，提取溫度對(duì)ELISA檢測(cè)結(jié)果的影響，探討了不同因素對(duì)測(cè)定結(jié)果影響的大小。結(jié)果表明，對(duì)ELISA測(cè)定結(jié)果影響最顯著的是甲醇濃度，其次是提取溶液體積、提取時(shí)間以及提取溫度。建立了新的ELISA法測(cè)定玉米中AFB1的前處理?xiàng)l件參數(shù)為:60目細(xì)度，7倍的75％甲醇溶液升溫到30℃時(shí)，振蕩45min提取。用高效液相法重點(diǎn)驗(yàn)證了酶免測(cè)試盒時(shí)，HPLC法測(cè)定AFB1標(biāo)準(zhǔn)曲線為在200μg/mL到

5、0.2μg/mL濃度的稀釋過(guò)程完全不產(chǎn)生偏差，線性相關(guān)系數(shù)為1.0000。在添加濃度為0.1～20ug/kg時(shí)，HPLC法加標(biāo)回收率為68％-88％，ELISA法的加標(biāo)回收率為60％-108％，用ELISA法測(cè)定時(shí)線性系數(shù)為0.9978，靈敏度為0.0497 ug/L，ELISA法測(cè)定玉米中AFB1與HPLC法測(cè)定時(shí)的回收率相當(dāng)。
　　3、江蘇省2011年南通地區(qū)新產(chǎn)玉米中AFB1污染狀況的調(diào)查表明，189份樣品中有11份樣品檢測(cè)