胡桃楸天然種群遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)的研究.pdf

1、本文采用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)對胡桃楸集中分布區(qū)內(nèi)6個(gè)種群共180個(gè)樣本的遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究,揭示不同地理分布區(qū)胡桃楸種群的遺傳關(guān)系,探討胡桃楸天然種群的遺傳分化機(jī)制,闡明不同生境條件對種群遺傳多樣性的影響,為胡桃楸資源有效保護(hù)和合理利用以及制定良種繁育策略提供理論依據(jù)。
　　 (1)采用了改良后的CTAB法和傳統(tǒng)CTAB法提取胡桃楸冬芽和韌皮部基因組DNA,結(jié)果表明改良后的CTAB法提取的DNA主帶清晰明亮,無明顯的拖

2、尾現(xiàn)象,點(diǎn)樣孔基本無滯留,提取的DNA較純,蛋白質(zhì)、多糖和酚類等雜質(zhì)基本去除,獲得了高質(zhì)量的基因組DNA。胡桃楸冬芽和韌皮部提取的DNA可以滿足實(shí)驗(yàn)需要,解決了季節(jié)性對實(shí)驗(yàn)的困擾問題。
　　 (2)利用正交設(shè)計(jì)與單因子實(shí)驗(yàn)相結(jié)合的方法對影響胡桃楸ISSR-PCR反應(yīng)體系的5個(gè)主要因素(Taq酶、Mg2+、dNTP、引物、模板DNA)在4個(gè)水平上進(jìn)行優(yōu)化設(shè)計(jì)。通過綜合比較分析,篩選出各反應(yīng)因素的最佳水平,建立胡桃楸ISSR-PCR

3、最佳反應(yīng)體系。在此基礎(chǔ)上篩選出14條多態(tài)性好,擴(kuò)增穩(wěn)定的ISSR引物,并確立了最佳退火溫度和循環(huán)次數(shù),得到胡桃楸ISSR-PCR反應(yīng)的最佳擴(kuò)增程序。
　　 (3)利用篩選出的14條引物對6個(gè)胡桃楸天然種群共180個(gè)樣本的遺傳多樣性進(jìn)行研究。共檢測到140個(gè)位點(diǎn),其中多態(tài)位點(diǎn)120個(gè),多態(tài)位點(diǎn)百分率(P)為85.71％。在物種水平上,胡桃楸的Shannon信息指數(shù)(Ⅰ)為0.4521,Nei指數(shù)(h)為0.3024,等位基因(na

4、)為1.8571,有效等位基因(ne)為1.5147,表明物種水平的遺傳多樣性較高；在種群水平上,遺傳多樣性隨緯度從南到北呈現(xiàn)單峰型變化規(guī)律,老爺嶺種群的遺傳多樣性最高,三合種群的最低。
　　 (4)胡桃楸天然種群間的遺傳分化較大,遺傳分化系數(shù)(Gst)為0.1618,胡桃楸的遺傳變異大多數(shù)存在于種群內(nèi),占總遺傳變異的83.82％,16.18％的變異存在于種群間。群間的基因流(Nm)為2.5904,結(jié)果表明,胡桃楸種群間較大的基