那西肽發(fā)酵技術(shù)的研究.pdf

1、那西肽產(chǎn)生菌屬于鏈霉菌屬中的活躍鏈霉菌。鏈霉菌在大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)和化學(xué)合成酶方面有特殊作用。鏈霉菌育種以及尋找新的鏈霉菌資源是一項(xiàng)活躍的領(lǐng)域。本論文在評(píng)述鏈霉菌育種方法的基礎(chǔ)上，主要研究了那西肽產(chǎn)生菌活躍鏈霉菌的育種及發(fā)酵技術(shù)，繼續(xù)提高高產(chǎn)活躍鏈霉菌的發(fā)酵單位，并嘗試用基因工程的方法育種。在發(fā)酵試驗(yàn)方面，采用星點(diǎn)設(shè)計(jì)—效應(yīng)面優(yōu)化法尋找較優(yōu)的發(fā)酵條件。 對(duì)那西肽產(chǎn)生菌活躍鏈霉菌采用了誘變、原生質(zhì)體再生和原生質(zhì)體融合等技術(shù)對(duì)菌種進(jìn)行篩

2、選。通過(guò)紫外線及亞硝基胍聯(lián)合誘變獲得的高產(chǎn)菌株7＃UN16，發(fā)酵單位達(dá)2100μg/ml，與出發(fā)菌種(發(fā)酵單位1300μg/ml)相比，發(fā)酵單位提高了61.54％。 將7＃UV、NTG、UV-NTG和轉(zhuǎn)化l3四個(gè)菌株融合，一次融合后不經(jīng)篩選直接進(jìn)行第二次融合，考察了其中的50個(gè)菌種，找到3個(gè)較好的菌株(相對(duì)于對(duì)照菌株)，其中發(fā)酵單位最高的達(dá)1579.5μg/ml，與出發(fā)菌株平均發(fā)酵單位931.5μg/ml相比，發(fā)酵單位提高了69

3、.57％。 用基因工程方法改良菌種的性狀，實(shí)驗(yàn)表明有VHB蛋白存在的菌株與出發(fā)菌株相比，那西肽的產(chǎn)量明顯提高，且轉(zhuǎn)化菌株傳代穩(wěn)定。其中采用轉(zhuǎn)化方法得到的9個(gè)菌株(平均發(fā)酵單位1536.3μg/ml)與出發(fā)菌株相比(發(fā)酵單位1351.3μg/ml)，發(fā)酵單位提高13.69％；采用結(jié)合轉(zhuǎn)移方法得到的9個(gè)菌株(平均發(fā)酵單位1394.7μg/ml)與出發(fā)菌株相比(發(fā)酵單位675.68μg/ml)，發(fā)酵單位提高106.41％。 以

4、(NH4)2SO4、Na2SO4、NaCl三種無(wú)機(jī)鹽為考察對(duì)象，以那西肽產(chǎn)量為指標(biāo)，采用星點(diǎn)設(shè)計(jì)的方法設(shè)計(jì)試驗(yàn)，用效應(yīng)面優(yōu)化法選取最佳工藝條件，用線性方程和二次多項(xiàng)式描述它們之間的數(shù)學(xué)關(guān)系，從分析結(jié)果中得到較優(yōu)的數(shù)學(xué)模型為： y=987.4702+4421.414x1+1016216x2+21.428x3-11699.3x12+387.818x22+1269.502x32-133.188x1x2+920.535x1x2-6870.71