葉酸偶聯(lián)二氧化硅包覆的金納米棒聯(lián)合125I粒子誘導(dǎo)肝癌HepG2細(xì)胞凋亡的實驗研究.pdf

1、目的：肝癌對于放射線相對不敏感，如何有效提高放療的敏感性和增益比一直是研究的難點(diǎn)。探討葉酸偶聯(lián)二氧化硅包覆的金納米棒（GNRs@SiO2-FA）聯(lián)合125I粒子誘導(dǎo)肝癌 HepG2細(xì)胞凋亡及其可能的機(jī)制，為臨床提高肝癌125I粒子組織間植入療效提供理論依據(jù)。
　　方法：利用種子生長法制備具有一定長軸比的金納米棒（GNRs），以二氧化硅作為殼材，制備出二氧化硅包覆的金納米棒（GNRs@SiO2），并用硅烷偶聯(lián)劑將葉酸聯(lián)接到 GNRs

2、@SiO2，制得葉酸偶聯(lián)二氧化硅包覆的金納米棒（GNRs@SiO2-FA）。體外培養(yǎng)肝癌HepG2細(xì)胞。利用透射電鏡對制備出的GNRs@SiO2-FA進(jìn)行表征，并觀察其靶向進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)情況。采用MTT法檢測其生物相容性。將體外培養(yǎng)的肝癌HepG2細(xì)胞隨機(jī)分成空白對照組，單純GNRs@SiO2-FA組，單純125I粒子照射組及GNRs@SiO2-FA聯(lián)合125I粒子照射組，采用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡情況，PT-PCR檢測Bax mRNA、B

3、cl-2 mRNA表達(dá)水平，蛋白印跡法檢測細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)情況，免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測凋亡基因Bax、Bcl-2表達(dá)水平及腫瘤細(xì)胞核增殖性抗原Ki67表達(dá)情況。
　　結(jié)果：GNRs@SiO2-FA在40ug/ml范圍內(nèi)對HepG2細(xì)胞生物學(xué)活性無明顯影響；透射電鏡下觀察到GNRs@SiO2-FA通過內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。流式細(xì)胞儀檢測4組肝癌HepG2細(xì)胞凋亡率，GNRs@SiO2-FA組、單純125I粒子照射組較空白對照組均有升

4、高(P<0.05)；聯(lián)合組較單純GNRs@SiO2-FA組和單純125I粒子照射組明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。聯(lián)合組 Bax mRNA表達(dá)明顯高于單純GNRs@SiO2-FA組與單純125I粒子照射組，Bcl-2 mRNA表達(dá)明顯低于單純GNRs@SiO2-FA組與單純125I粒子照射組。Western Blot顯示凋亡相關(guān)蛋白Bax、Caspase-3明顯上調(diào)，Bcl-2明顯下調(diào)。Bax表達(dá)于胞漿，Bcl-2表達(dá)于胞漿

5、和胞膜，Ki67表達(dá)于胞核，陽性表現(xiàn)均為棕黃色細(xì)顆粒狀沉淀。4組肝癌 HepG2細(xì)胞凋亡相關(guān)基因 Bax、Bcl-2及增殖核抗原 Ki67蛋白表達(dá)量比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；聯(lián)合組較單純GNRs@SiO2-FA組和單純125I粒子照射組Bax蛋白陽性表達(dá)率明顯升高，Bcl-2、Ki67蛋白陽性表達(dá)率明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：GNRs@SiO2-FA能夠提高肝癌細(xì)胞的放射敏感性，GNRs