二氮嗪拮抗軟骨細(xì)胞氧化損傷的作用及機(jī)制探索.pdf

1、目的:探討二氮嗪對(duì)雙氧水誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞氧化損傷的影響。
　　方法:取SD乳鼠膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)，將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的軟骨細(xì)胞分成5組，分別為陰性對(duì)照組(A)，雙氧水組(B)，H2O2+0.1umo l/L二氮嗪(diazoxide，DZ)組(C)，H2O2+1.0umol/L二氮嗪(DZ)組(D)，H2O2+10umol/L二氮嗪(DZ)組(E);A組細(xì)胞不做特殊處理，B組用0.3mmol/L雙氧水在37℃恒溫箱內(nèi)孵育4小時(shí)，C

2、、D、E組預(yù)先分別用0.1umol/L DZ，1.0umol/L DZ，10umol/L DZ在37℃的恒溫箱孵育30分鐘，PBS洗滌細(xì)胞，再用0.3mmol/L雙氧水在37℃恒溫箱內(nèi)孵育4小時(shí)。分別檢測(cè)ABCDE各組細(xì)胞的細(xì)胞活性，ROS(reactive oxide species)的量，細(xì)胞凋亡情況。
　　結(jié)果:
　?、費(fèi)TT法檢測(cè)各組細(xì)胞活性，細(xì)胞活性率從大至小依次為A組＞D組＞C組＞E組＞B組;
　　②用活性

3、氧探針DCFH-DA檢測(cè)各組細(xì)胞中的ROS的量，ROS產(chǎn)量從多至少依次為B組＞E組＞D組＞C組＞A組;
　?、哿魇郊?xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡情況，各組細(xì)胞凋亡率由大至小依次為B組＞E組＞D組＞C組。
　?、躓estern bolt檢測(cè)各組軟骨細(xì)胞中HIF-1α蛋白的表達(dá)，各組軟骨細(xì)胞中HIF-1α蛋白表達(dá)量依次為C組＞D組＞E組＞A組＞B組。
　　結(jié)論:二氮嗪可降低雙氧水誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞的凋亡率，同時(shí)也降低雙氧水誘導(dǎo)的軟骨細(xì)