聚丙烯酰胺雜化凝膠的制備及其固定化甘油脫氫酶研究.pdf

1、生物基1，3-丙二醇是制備聚對苯二甲酸丙二醇酯的天然可再生資源，在地毯、工程塑料、服裝面料等領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。本論文主要圍繞如何制備固定化多酶體系及利用其催化甘油生產(chǎn)1，3-丙二醇展開探討，主要研究內(nèi)容如下：
　　 1、采用沉降法研究不同分散劑對超細(xì)TiO2粉末水溶液分散性能的影響，結(jié)果顯示分散劑分散效果強弱依次為：甘油>聚乙二醇辛基苯基醚(曲拉通X-100)>乙二醇>烷基酚聚氧乙烯醚(OP-10)。
　　 2、以TiO2/

2、PAM無機-有機雜化凝膠為載體，吸附-絮凝法固定模型蛋白木瓜蛋白酶，并利用正交設(shè)計法找出最佳負(fù)載工藝。結(jié)果顯示，固定化過程中，影響負(fù)載最因素顯著順序依次為：固定pH>給酶量>吸附時間>固定溫度>PAM摻雜量；固定最佳工藝條件為：先在含0.2 g TiO2的納米凝膠中加入30 mg木瓜蛋白酶，在35℃pH=8.0環(huán)境條件下先吸附10 min，再加入0.2 mg PAM絮凝30 min，此時負(fù)載率最高可達(dá)97.36％。
　　 3、利

3、用粒度測定、zeta電位分析、SEM/EDS及IR的表征手段，分析固定化酶的形貌和作用機制。結(jié)果顯示：TiO2與木瓜蛋白酶在最適合的pH范圍內(nèi)，靜電吸附在固定過程中起主要作用，其粒徑在444 nm附近，結(jié)構(gòu)疏松多孔，比表面積比較大，且酶分子在載體中分布均勻，沒有明顯團聚現(xiàn)象。
　　 4、選用克雷伯桿菌為粗酶制備的菌種來源，確定粗酶提取的步驟依次為：先增殖培養(yǎng)，離心收集菌體；洗滌并稱重，加入生理鹽水混勻，冰浴環(huán)境下超聲波破碎、高速

4、冷凍離心后獲得粗酶液，再經(jīng)飽和度50～55％的硫酸銨分級沉淀及透析脫鹽，最后用 pH=7.0～8.0的Tris-HCl緩沖溶液配制成多酶溶液，并4℃冰箱保存。
　　 5、利用TiO2/PAM作為固定載體，吸附-絮凝法共固定克雷伯桿菌粗酶中的甘油脫氫酶、甘油脫水酶及1，3-丙二醇氧化還原酶，并探討游離酶和固定化多酶體系的酶學(xué)性質(zhì)和酶促動力學(xué)。結(jié)果表明：固定最適宜pH為7.5，溫度為37℃，此時酶的最大負(fù)載量和相對酶活可達(dá)到104.