P2X7受體在大鼠神經痛疼痛機制中的作用.pdf

1、目的：P2X7受體是一種ATP門控的非選擇性陽離子通道受體,在中樞神經系統(tǒng)內主要表達在小膠質細胞上,而在外周神經系統(tǒng)的背根神經節(jié)(DorsalRootGanglion,DRG)內表達在衛(wèi)星細胞上。其激活后可引起Na+,Ca2+的內流以及K+離子的外流,同時調節(jié)小膠質細胞內IL-1β的成熟和釋放。雖然近年來已有少量文獻報道,P2X7受體與神經痛模型疼痛的發(fā)生密切相關,但是對于P2X7受體在神經痛疼痛發(fā)生機制中的作用仍然不是很清楚。本實驗應

2、用脊神經高位結扎(SpinalNerveLigation,SNL)神經痛模型大鼠,運用免疫熒光、ELISA技術來探討P2X7受體在神經痛疼痛發(fā)生機制中的作用。
　　 方法：制作SNL大鼠神經病理性疼痛模型,測定疼痛閾值的經時變化過程,以便進行后續(xù)研究。采用蛛網膜下腔給藥的方法,將P2X7受體特異性拮抗劑考馬斯亮藍(BrilliantBlueG,BBG)注射到SNL模型大鼠體內,每日一次,每次10μL(10μM),連續(xù)7日。同時,

3、使用WonFreyFilament來測定大鼠機械性痛閾的變化情況。然后,取大鼠腰骶膨大處脊髓和LA,L5,L6DRG,運用免疫熒光技術觀察大鼠脊髓背角上的星形膠質細胞以及DRG上衛(wèi)星細胞的激活情況。最后,運用ELISA技術檢測大鼠腰骶膨大處脊髓背角內IL-1β的蛋白含量。
　　 結果：SNL大鼠機械性痛閾經時曲線顯示,手術后第3天大鼠術側腳出現(xiàn)疼痛行為,此疼痛行為可一直持續(xù)四周,其中第5天到第15天這段時間內疼痛最為敏感和穩(wěn)定,

4、縮足閾(PawWithdrawThreshold,PWT)≤4g。而SNL大鼠手術對側腳和正常組大鼠則無疼痛行為發(fā)生。隨后,選取SNL大鼠疼痛最敏感和最穩(wěn)定的時期,將SD大鼠分為5組,即模型組(SNL手術)、陽性組(SNL術后注射BBG)、陰性對照組(SNL術后注射生理鹽水)、正常組(無任何處理)和假手術組。陰性對照組大鼠在第3天、第5天、第7天的縮足閾分別為4.77±1.33g,4.22±1.02g,4.04±1.67g,與模型組大鼠

5、相比無顯著性差異,而陽性組大鼠在以上時間點的PWT則顯著升高,分別為8.28±1.57g、7.9±2.12g、7.12±1.38g。在免疫熒光試驗中,可觀察到鞘內注射BBG第7天,陽性組大鼠手術同側腰骶膨大處脊髓背角內以及L5DRG內GFAP的表達量與陰性對照組和模型組相比都有所下降;在ELISA試驗中,可觀察到鞘內注射BBG第7天,陽性組大鼠腰骶膨大處脊髓背角內IL-1β的蛋白含量與陰性對照組相比下降了32％。
　　 結論：在