蛋白冠對三維納米石墨烯內(nèi)吞途徑及功能影響的研究.pdf

1、肝癌作為高致死率的癌癥，為人類健康帶來很大威脅。傳統(tǒng)的肝癌治療方法有不同程度的局限性，使用新型納米藥物有望為肝癌患者帶來福音。國家納米藥物工程技術(shù)研究中心張春副教授課題組以三蝶烯分子為基礎(chǔ)，三取代六苯并蔻而合成新型三維納米石墨烯（Three dimensional nanographene，簡稱NG）。研究發(fā)現(xiàn)NG納米粒在體外是一種可以選擇殺傷肝癌細(xì)胞的納米藥物，它具有良好的熒光特性、抗光漂白性、強自組裝能力等。NG納米粒通過巨胞飲和網(wǎng)

2、格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞途徑被細(xì)胞攝取，最終通過損傷線粒體造成HepG2細(xì)胞內(nèi)ROS的積累，最終產(chǎn)生對HepG2肝癌細(xì)胞的選擇性殺傷作用。但之前的實驗并未在體內(nèi)實驗和有血清環(huán)境中進(jìn)行，忽略了血清蛋白對其本身性質(zhì)的影響，而NG納米粒發(fā)揮藥效必須要進(jìn)入到復(fù)雜的生理環(huán)境中去。因此，此實驗通過模擬生物體內(nèi)的生理環(huán)境，來探究血清蛋白在NG納米粒表面形成蛋白冠后對肝癌細(xì)胞功能、內(nèi)吞途徑的影響。
　　本實驗的主要內(nèi)容和結(jié)論包括：
　?。?）將NG

3、納米粒置于體外模擬的生理環(huán)境中進(jìn)行孵育，離心收集納米粒后，通過SDS-PAGE凝膠電泳判斷NG納米粒是否與血清蛋白存在相互作用。電泳圖譜顯示NG納米粒能夠與蛋白質(zhì)發(fā)生相互作用，其吸附蛋白的量與血清濃度成正比。
　?。?）體外證明NG納米?？膳c血清蛋白發(fā)生相互作用。牛血清白蛋白（Bovine serum albumin，簡稱BSA），是胎牛血清中含量達(dá)到38％，通過選用BSA模擬體內(nèi)生理環(huán)境的蛋白條件，不同濃度的NG納米粒進(jìn)行孵育后

4、，通過BSA分子中熒光光譜的變化、熒光淬滅機制的分析、紫外光譜和圓二色譜比較后，結(jié)果表明NG納米?？赡芘cBSA分子相互作用導(dǎo)致BSA分子構(gòu)象發(fā)生改變。
　?。?）NG納米粒與血清蛋白相互作用改變NG納米粒在肝癌HepG2細(xì)胞的功能及內(nèi)吞途徑。將含不同濃度血清培養(yǎng)基的NG納米粒作用于HepG2細(xì)胞，MTT實驗表明，隨著NG納米粒與血清濃度的增加，對HepG2細(xì)胞的殺傷作用顯著下降。內(nèi)吞實驗證明了HepG2細(xì)胞對NG納米粒的攝入量隨血