香煙煙霧提取物對人臍靜脈內皮細胞表達sEPCR和mEPCR的影響及辛伐他汀的干預作用.pdf

1、研究背景
　　 血管內皮的完整和功能的正常對于維持血流通暢具有重要意義。大量研究資料表明,吸煙可以損傷血管內皮細胞,導致內皮細胞功能障礙,引發(fā)血栓的形成。近年來,內皮細胞蛋白C受體(endothelial cell protein C receptor,EPCR)與血栓形成的關系引起學術界的高度重視。當各種因素導致內皮細胞受損時,膜聯(lián)EPCR(membrane associated EPCR,mEPCR)由內皮細胞脫落,致使可溶

2、性EPCR(soluble EPCR,sEPCR)濃度升高,使血栓形成的風險顯著增加。因此,測定sEPCR成為反映血栓形成的敏感指標之一。辛伐他汀除其調脂作用之外,還具有內皮保護、抗凝、抑制血小板聚集與抗炎等作用。辛伐他汀是否可以改善香煙煙霧提取物(cigarette smoke extract,CSE)介導的內皮細胞凝血功能障礙,尚未見報道。
　　 目的：
　　 研究不同條件CSE對人臍靜脈內皮細胞(human umb

3、ilical vein endothelial cells,HUVECs)表達可溶性內皮細胞蛋白C受體(sEPCR)和膜聯(lián)內皮細胞蛋白C受體(mEPCR)的影響及辛伐他汀的干預作用。
　　 方法：
　　 采用HUVECs細胞株進行以下實驗。
　　 (1)CSE對HUVECs表達sEPCR的時間及濃度依賴性：HUVECs培養(yǎng)后接種于24孔培養(yǎng)板中,隨機分為對照組及實驗組,進行以下研究。①CSE作用的濃度依賴性：分別

4、用0％、2.5％、5％及10％的CSE孵育細胞,8h后收集各組上清液：②CSE作用的時間依賴性：用5％CSE與細胞分別孵育0、4、8、12及24h,每組均設立對照,收集各組上清液。采用酶聯(lián)免疫吸附雙抗體夾心分析法(ELISA)測定各組上清液中sEPCR的含量。
　　 (2)辛伐他汀的干預作用：HUVECs培養(yǎng)后接種于25cm×25cm的培養(yǎng)瓶中,隨機分為對照組、5％CSE組、不同濃度辛伐他汀組及辛伐他汀干預組。對照組培養(yǎng)液中不加

5、任何干預；辛伐他汀組分別加入終濃度為50、100、200μmol/L的辛伐他汀液孵育24h,辛伐他汀干預組先以50、100、200μmol/L的辛伐他汀預處理細胞2h,再與5％CSE孵育24h。收集各組的細胞及上清液,ELISA法檢測上清液中sEPCR蛋白含量,實時定量PCR法檢測各組細胞中mEPCRmRNA的表達。
　　 結果：
　　 (1)CSE對HUVECs表達sEPCR的時間及濃度依賴性：①HUVECs與不同濃度

6、CSE孵育8h后,5％、10％CSE組與對照組比較,sEPCR表達明顯升高,差異有統(tǒng)計學意義,(均P＜0.05),2.5％CSE組升高與對照組比較則無統(tǒng)計學意義(P＞0.05),5％、10％CSE兩組間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；②HUVECs與5％CSE組分別孵育0、4、8、12及24h后,不同時間點5％CSE組sEPCR表達均高于對照組,其中8、12、24h組與對照組比較,差異有統(tǒng)計學意義(均P＜0.05),且呈時間依賴性。<

7、br>　　 (2)辛伐他汀的干預作用：①5％CSE組sEPCR蛋白含量高于對照組,mEPCRmRNA表達低于對照組,差異均有統(tǒng)計學意義(均P＜0.05)；②100μmol/L與200μmol/L辛伐他汀組sEPCR蛋白含量均高于對照組,低于5％CSE組,其mEPCRmRNA表達均低于對照組,高于5％CSE組,差異均有統(tǒng)計學意義(均P＜0.05)；③各辛伐他汀干預組sEPCR蛋白含量均低于5％CSE組,但高于對照組及相應濃度的辛伐他汀組