一氧化氮對單側(cè)輸尿管梗阻大鼠模型腎間質(zhì)纖維化的影響及其機制的實驗研究.pdf

1、目的：建立大鼠單側(cè)輸尿管梗阻( unilateral ureteral occlusion， UUO)模型，觀察管周毛細血管（peritubular capillary, PTC）損傷對腎間質(zhì)纖維化(renal interstitial fibrosis, RIF)進展的影響，并予以L-精氨酸（L-arginine, L-Arg）、N-硝基-L精氨酸甲酯（nitro-L-arginine methylester， L-NAME）干預(yù)，觀

2、察一氧化氮(Nitric Oxide, NO)的變化對腎臟血管新生及腎間質(zhì)纖維化的影響并探討其相關(guān)機制。
　　 方法：雄性SD大鼠90只，隨機分五組，正常對照組(Con)、假手術(shù)組(SO)、單側(cè)輸尿管梗阻模型-飲用水組(UUO-water， UW)、單側(cè)輸尿管梗阻模型-L-Arg組(UUO-Arg，UA)、單側(cè)輸尿管梗阻模型-L-NAME(UUO-NAME,UN)，每組各18只。UUO各組均行單側(cè)輸尿管結(jié)扎術(shù)，假手術(shù)組只游離輸尿

3、管而不結(jié)扎后關(guān)閉腹腔，正常對照組不對大鼠做任何處理。模型建立1周后UA、UN、UW組大鼠分別被給予含1g/dl L-Arg的飲用水、含5mg/dl L-NAME的飲用水和飲用水。各組大鼠分別于術(shù)后第2、3、4周末處死，收集靜脈血和腎臟標(biāo)本。全自動血生化分析儀檢測腎功能，分光光度計檢測NO含量，HE及Masson染色觀察腎組織的病理改變，免疫組化和免疫印跡檢測血管內(nèi)皮細胞生長因子(vascular endothelial growth f

4、actor, VEGF)、內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase, eNOS)、低氧誘導(dǎo)因子-1α( hypoxia inducible factor-1α, HIF-1α)、轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming growth factor-βi, TGF-βi）的表達，通過氨肽酶P(aminopeptidase P，JG12)免疫組化觀察PTC密度的變化。
　　 結(jié)果：1

5、.HE、Masson染色觀察腎臟基本組織結(jié)構(gòu)示：Con組和SO組各時間點大鼠腎組織結(jié)構(gòu)形態(tài)正常，而UUO各組出現(xiàn)不同程度的腎小管擴張、萎縮、空泡變性，炎癥細胞浸潤，間質(zhì)增寬，隨著時間的延長，腎間質(zhì)纖維化逐漸加重。UA組大鼠左腎各時間點病理改變較UW組輕，而UN組間質(zhì)纖維化較UW組重，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。2．免疫組化和免疫印跡結(jié)果顯示：Con組和SO組腎臟VEGF表達豐富，eNOS表達較多，PTC密度正常，HIF-1α、T

6、GF-β1低表達。隨梗阻時間的延長，UUO各組VEGF和eNOS的表達及PTC密度均明顯降低，但UA組高于UW組，而UN組低于UW組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。UUO各組HIF-1α、TGF-β1表達隨梗阻時間的延長均逐漸增多，但UA組表達低于UW組，而UN組表達高于UW組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。3.NO含量變化：Con組和SO組大鼠腎臟中NO含量較低，術(shù)后2周，UUO各組NO含量明顯升高，隨梗阻時間的延長，NO

7、水平進一步增加。UUO各組中，UA組NO水平較同期UW組明顯增加，UN組NO含量較UW組明顯減少，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。4．血生化檢測結(jié)果顯示：各時間點Con組、SO組、UW組、UA組及UN組大鼠血清肌酐值、尿素氮值差別不大，無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：大鼠UUO模型存在腎臟微血管損傷及繼發(fā)引起的組織缺氧，且PTC密度減少與腎間質(zhì)纖維化程度密切相關(guān)。提高內(nèi)皮源性NO濃度可促進腎臟缺血組織的血管新生。