LHRH-TAT-殼聚糖-siRNA復合物與巨噬細胞的相互作用以及TPP-LHRH-MPG△NLS-AFP-siRNA復合物對腫瘤生長的影響.pdf

1、RNA干擾（RNA interference，RNAi）是普遍存在于真核生物體內(nèi)的一種能夠?qū)μ囟ǖ膍RNA序列進行降解的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控機制。在包括肝癌在內(nèi)的多種癌癥疾病的治療研究中具有良好的應用前景。然而，由于RNA本身具有的易降解、不易穿過細胞膜等特點，為RNAi的臨床應用制造了很大的阻礙。新型基因載體能夠提高RNA的遞送效率，但其生物相容性、RNA釋放以及對RNAi效率的影響需要更加深入的評估。
　　生物相容性是評價非病毒載體與機

2、體相互作用的一個指標，載體與免疫系統(tǒng)的相互作用不僅反映了免疫系統(tǒng)對載體的應答情況，也是衡量載體是否對人體組織損傷程度的一個指標。
　　本文以不同N/P比（1∶2、1∶1、2∶1、5∶1和10∶1）使LHRH-TAT-殼聚糖（LHRH-TAT-chitosan，TLC）以及未進行任何修飾的低分子量殼聚糖（low molecular weight chitosan，LMWC）包裹siRNA后形成TLC/siRNA納米復合體。與未進行任

3、何修飾的殼聚糖相比，TLC具有更好的siRNA結(jié)合能力。以不同N/P(10∶1、20∶1)與siRNA形成納米復合體后，其粒徑分布于90-150 nm，zeta電位穩(wěn)定在+2.7-+19.3 mV。體內(nèi)與體外的巨噬細胞吞噬實驗證明，相比LWMC/siRNA復合物而言，含200 nmol/L siRNA的TLC/siRNA納米復合物在24 h內(nèi)未引起上述細胞因子的明顯釋放，TLC/siRNA納米復合物被巨噬細胞攝入量更高，但兩者均未對吞噬

4、活性和細胞因子生成產(chǎn)生明顯影響。因此，TLC無明顯免疫毒性，是一種有應用前景的siRNA載體。
　　研究人員曾經(jīng)利用三聚磷酸鈉(sodium tripolyphosphae，TPP)對殼聚糖、PEG等載體進行改性，從而提高了載體的藥物運送效率。本文利用化學交聯(lián)的方式，將TPP與LHTH-MPGΔNLs載體的氨基酸相連接，制成新型TPP-LHRH-MPGΔNLS載體，并包裹AFP-siRNA。與未進行TPP修飾的LHRH-MPGΔ

5、NLS/APF-siRNA納米復合體相比，TPP-LHRH-MPGΔNLs/APF-siRNA納米復合體的zeta電位變高，在對腫瘤細胞的生長抑制實驗中，TPP-LHRH-MPGΔNLs/APF-siRNA納米復合體于轉(zhuǎn)染后48 h開始對HepG2，Bel7402兩種肝癌細胞的成活率有明顯影響，而TPP-LHRH-MPGΔNLs/APF-siRNA納米復合體作用下的肝癌細胞的成活率略低于未修飾TPP的納米復合體。RT-PCR對AFP基因