表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(EGCG)對(duì)昆明小鼠新鮮-凍融精子體外受精胚胎發(fā)育的影響.pdf

1、目的：⑴分析EGCG對(duì)昆明(KM)小鼠新鮮/凍融精子體外受精胚胎發(fā)育的影響。⑵探討EGCG應(yīng)用于體外受精胚胎培養(yǎng)體系的安全性。
　　 方法：①分別在體外受精培養(yǎng)體系的受精液、胚胎發(fā)育培養(yǎng)液中添加不同濃度的EGCG（0、5、10、15、25μg/ml）；或同時(shí)在受精液、胚胎發(fā)育培養(yǎng)液中添加不同濃度的EGCG（0、5、10、15、25μg/ml），觀察和比較KM小鼠新鮮精子體外受精的受精率和胚胎發(fā)育能力（卵裂率、囊胚形成率和優(yōu)質(zhì)4-

2、細(xì)胞胚胎率）。②同時(shí)在體外受精培養(yǎng)體系的受精液和胚胎發(fā)育培養(yǎng)液中添加不同濃度的EGCG（0、10、17.5、25、50μg/ml），觀察和比較KM 小鼠凍融精子體外受精的受精率和胚胎發(fā)育能力（卵裂率、4-細(xì)胞胚胎形成率、優(yōu)質(zhì)4-細(xì)胞胚胎率和囊胚形成率）。
　　 結(jié)果：⑴與對(duì)照組(EGCG 0μg/ml)相比，體外受精培養(yǎng)體系中添加10μg/ml EGCG后，明顯提高了KM小鼠新鮮精子體外受精的囊胚形成率和優(yōu)質(zhì)4-細(xì)胞胚胎率（P<

3、0.05 ；P<0.05）。三種EGCG 添加方式：受精液?jiǎn)为?dú)添加，胚胎發(fā)育培養(yǎng)液?jiǎn)为?dú)添加，或受精液和胚胎發(fā)育培養(yǎng)液同時(shí)添加，對(duì)體外受精結(jié)局均存在有利影響，以最后一種添加方式更明顯，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。然而當(dāng)受精液中EGCG添加濃度增加至25μg/ml時(shí)，反而明顯降低了小鼠的受精率（P<0.05）；胚胎發(fā)育培養(yǎng)液中添加25μg/ml EGCG時(shí)，卵裂率下降明顯（P<0.01）；而且均未發(fā)現(xiàn)4-細(xì)胞胚胎和囊胚形成。此外，5

4、、15、20μg/mlEGCG 添加濃度，對(duì)小鼠體外受精的影響不明顯，與對(duì)照組相比，受精率、卵裂率、囊胚形成率和優(yōu)質(zhì)4-細(xì)胞胚胎率四項(xiàng)觀察指標(biāo)的變化均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。⑵KM 小鼠精子冷凍復(fù)蘇后，活率和活力都發(fā)生了下降；而且凍融精子組的體外受精率和卵裂率、囊胚形成率均比新鮮精子組低，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05；P<0.05；P<0.05）。與對(duì)照組(EGCG 0μg/ml)相比，當(dāng)KM 小鼠凍融精子體外受精培養(yǎng)體系中添加

5、10、17.5μg/ml EGCG 后，均能提高體外受精的受精率,卵裂率，4-細(xì)胞胚胎形成率，優(yōu)質(zhì)4-細(xì)胞胚胎率和囊胚形成率，其中受精率和優(yōu)質(zhì)4-細(xì)胞胚胎率的提高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05；P<0.05），以17.5μg/ml 添加濃度效果更明顯。25μg/ml EGCG 添加濃度對(duì)KM 小鼠凍融精子體外受精的影響不明顯，各項(xiàng)觀察指標(biāo)的變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。當(dāng)添加濃度增加至50μg/ml時(shí)，未觀察到有受精卵形成。
　　

6、 結(jié)論：①KM小鼠體外受精培養(yǎng)體系中添加適宜濃度的EGCG可提高新鮮精子體外受精的囊胚形成率和優(yōu)質(zhì)4-細(xì)胞胚胎率，促進(jìn)胚胎發(fā)育。然而高濃度的EGCG 卻可導(dǎo)致KM 小鼠新鮮體外受精率明顯下降，并引起胚胎發(fā)育阻滯。即EGCG 對(duì)體外受精胚胎發(fā)育隨著添加濃度的變化存在有利和有害的影響。EGCG應(yīng)用時(shí)必須注意其安全性。②采用受精液和配胚胎發(fā)育培養(yǎng)液同時(shí)添加抗氧化劑方式，即抗氧化損傷保護(hù)措施盡量貫穿整個(gè)體外受精、種植前胚胎發(fā)育培養(yǎng)過(guò)程，可能更