番茄紅素對(duì)兔動(dòng)脈粥樣硬化形成和內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷的影響.pdf

1、目前認(rèn)為動(dòng)脈粥樣硬化疾病表現(xiàn)了一種高氧化應(yīng)激狀態(tài),活性氧(reactive oxygen species,ROS)誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激在動(dòng)脈粥樣硬化疾病的發(fā)病中有重要作用。在動(dòng)脈粥樣硬化形成和發(fā)展的病理過(guò)程,活性氧不僅氧化修飾低密度脂蛋白,促進(jìn)泡沫細(xì)胞形成,而且活性氧介導(dǎo)的脂質(zhì)過(guò)氧化還可以破壞血管內(nèi)皮細(xì)胞,導(dǎo)致其功能障礙,從而促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展。在冠心病的發(fā)病過(guò)程中從初發(fā)脂紋到斑塊損傷發(fā)展,內(nèi)皮功能受損具有十分重要的意義。血管內(nèi)皮細(xì)胞功

2、能障礙是動(dòng)脈粥樣硬化的早期病理改變,而脂質(zhì)過(guò)氧化則可能為內(nèi)皮功能受損的始動(dòng)環(huán)節(jié)之一。因此,抗氧化劑通過(guò)阻止氧化應(yīng)激損傷對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化疾病的防治是有積極意義的。
　　大量的流行病學(xué)資料顯示,番茄紅素的攝入量與冠心病的危險(xiǎn)性呈負(fù)相關(guān),血漿低番茄紅素有更高的急性心肌梗死和腦卒中的危險(xiǎn)性。但其防治這些疾病的具體機(jī)制尚不清楚。番茄紅素是很好的抗氧化劑,通過(guò)阻斷或抑制氧化應(yīng)激損傷可能是番茄紅素抗動(dòng)脈粥樣硬化的形成的一條途徑。我們?cè)噲D通過(guò)動(dòng)物實(shí)

3、驗(yàn)和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究探討其抗動(dòng)脈粥樣硬化疾病的作用及機(jī)制。
　　第一部分番茄紅素對(duì)兔動(dòng)脈粥樣硬化形成的影響
　　目的：觀察番茄紅素對(duì)高脂喂飼所致新西蘭家兔動(dòng)脈粥樣硬化形成和脂質(zhì)過(guò)氧化損傷的影響。
　　方法：采用高脂喂飼模型,將30只新西蘭家兔隨機(jī)分為3組:對(duì)照組、高脂模型組和番茄紅素組,分別給予普通飼料和高脂飼料喂養(yǎng),番茄紅素組另加用番茄紅素(每兔每天每公斤體重給予6％番茄紅素粉劑60mg);于實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前1天和開(kāi)始后第2、

4、4、6、8周末取空腹血測(cè)定血清總膽固醇,甘油三酯,高密度脂蛋白膽固醇,血清超氧化物歧化酶活性,丙二醛含量,血清一氧化氮含量和一氧化氮合酶活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,主動(dòng)脈蘇丹Ⅳ染色并拍下照片,觀察脂質(zhì)斑塊面積。主動(dòng)脈常規(guī)包埋切片,進(jìn)行HE染色,顯微鏡下觀察。
　　結(jié)果：與高脂模型組相比,番茄紅素組血清甘油三酯含量減低;總膽固醇差異無(wú)顯著性;血清超氧化物歧化酶活性明顯增加;血清丙二醛的含量減少;一氧化氮合酶活性差異無(wú)顯著性;一氧化氮含量增加;

5、主動(dòng)脈脂質(zhì)斑塊面積減少。
　　結(jié)論：番茄紅素對(duì)兔主動(dòng)脈脂質(zhì)過(guò)氧化損傷具有較好的保護(hù)作用,能減輕高脂兔動(dòng)脈粥樣硬化病變形成。降甘油三酯,抗脂質(zhì)過(guò)氧化損傷及保護(hù)血管內(nèi)皮功能可能是番茄紅素產(chǎn)生抗動(dòng)脈粥樣硬化作用的重要機(jī)制。
　　第二部分番茄紅素對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用
　　目的：觀察番茄紅素對(duì)活性氧介導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷及凋亡的保護(hù)作用;觀察番茄紅素對(duì) p53,caspase-3,ICAM-1mRNA表達(dá)的影響;探討番茄

6、紅素作用的可能機(jī)制。
　　方法：用H2O2處理內(nèi)皮細(xì)胞,觀察在不同濃度H2O2作用下,以及同一濃度H2O2作用不同時(shí)間對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的損傷,制造氧化損傷模型;并用番茄紅素及H2O2共孵育內(nèi)皮細(xì)胞,觀察不同濃度番茄紅素作用下對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用,及觀察p53,caspase-3,ICAM-1mRNA的表達(dá)。倒置顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況;MTT法測(cè)定細(xì)胞活力;Hoechst染色研究對(duì)細(xì)胞凋亡的影響;采用流式細(xì)胞術(shù)細(xì)胞凋亡的影響;測(cè)M

7、DA看細(xì)胞的脂質(zhì)過(guò)氧化水; RT-PCR觀察mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果：顯微鏡觀察可見(jiàn)番茄紅素組內(nèi)皮細(xì)胞受損收縮程度減輕;番茄紅素能減少內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷的產(chǎn)物MDA水平;提高內(nèi)皮細(xì)胞的活性;Hoechst染色結(jié)果顯示番茄紅素組內(nèi)皮細(xì)胞出現(xiàn)凋亡特征性改變的細(xì)胞核數(shù)目減少;流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示,番茄紅素能降低氧化損傷內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡率; RT-PCR結(jié)果顯示,番茄紅素組內(nèi)皮細(xì)胞p53,caspase-3,ICAM-1mRNA的表達(dá)明顯