胃癌相關(guān)甲基化基因的篩選與鑒定.pdf

1、實驗?zāi)康模?br>　　人類基因的異常改變是癌癥發(fā)生發(fā)展的重要生物學(xué)標(biāo)志之一。近年來研究發(fā)現(xiàn)在胃癌組織中常會出現(xiàn)某些特定基因的啟動子區(qū)的甲基化水平異常。在前期工作中我們發(fā)現(xiàn)了在胃癌中可能存在啟動子區(qū)CpG島甲基化水平異常改變的10個候選基因，本實驗利用基于飛行質(zhì)譜的高通量CpG位點甲基化程度檢測的方法(Mass-Array)和結(jié)合亞硫酸鹽的測序技術(shù)(BSP)的檢測方法對候選基因進行了篩選、鑒定和并對其相關(guān)功能進行研究。
　　實驗設(shè)計

2、：
　　通過BSP和Mass-Array方法定性和定量的檢測候選基因啟動子區(qū)CpG島的甲基化情況。通過實時熒光定量PCR的方法來檢測該基因在組織和細(xì)胞中的表達(dá)水平。最后結(jié)合樣本的臨床資料進行臨床相關(guān)性分析研究。
　　實驗結(jié)果：
　　通過研究發(fā)現(xiàn)基因DHRS3,短鏈脫氫酶家族中的一員，在胃癌中作為表觀遺傳學(xué)修飾的目標(biāo)基因，參與胃癌的發(fā)生發(fā)展。該基因啟動子區(qū)的CpG島在胃癌組織中呈高甲基化改變。BSP和Mass-Array

3、所檢測的120例樣本中，癌組織與正常組織相比該基因在癌組織中表現(xiàn)出明顯的高甲基化改變p<0.0001。且與該基因的mRNA表達(dá)成負(fù)相關(guān)性。在臨床相關(guān)性分析中發(fā)現(xiàn)該基因的改變與胃癌的組織學(xué)類型和分化程度密切相關(guān)。
　　結(jié)論：
　　實驗結(jié)果表明與正常組織相比在胃癌組織中基因DHRS3啟動子區(qū)CpG島呈顯著的高甲基化改變，且mRNA表達(dá)顯著降低，提示該基因在胃癌發(fā)生發(fā)展中可能起到抑癌基因的作用。該基因啟動子區(qū)CpG島甲基化程度的異