實(shí)驗(yàn)性鉛性腎病腎臟纖維化發(fā)病機(jī)理及其防治的研究.pdf

1、第一章鉛對(duì)大鼠腎臟纖維化相關(guān)因子表達(dá)的影響研究背景：鉛是一種常見的工業(yè)毒物和環(huán)境污染物，鉛性腎病為中毒職業(yè)人群死亡原因的第二位。研究資料顯示鉛性腎病患者中幾乎都有腎臟纖維化的改變。鉛性腎病早期可完全治愈，而一旦出現(xiàn)腎小球硬化、腎間質(zhì)纖維化甚至腎功能衰竭，病變將不可逆轉(zhuǎn)。但到目前為止鉛性腎病的機(jī)理尚不清楚，我國(guó)對(duì)本病的基礎(chǔ)研究報(bào)道較少，國(guó)外研究主要集中于探討鉛親合蛋白及核包涵體與腎損害的關(guān)系，對(duì)鉛導(dǎo)致腎臟纖維化的分子機(jī)理，國(guó)內(nèi)外目前尚無

2、相關(guān)報(bào)道。 目的：從蛋白質(zhì)和分子水平觀察鉛對(duì)大鼠腎臟纖維化相關(guān)因子核因子-κB(NF-κB)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TGF-β)、干擾素-γ(IFN-γ)及纖維連接蛋白(FN)表達(dá)的影響。 方法：SD大鼠48只適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，采用隨機(jī)原則將動(dòng)物分為6組，每組8只，Ac、Bc、Cc組為正常對(duì)照組，分別予蒸餾水喂飲1月、2月、3月；A、B、C為染鉛組，分別給O.5％的醋酸鉛喂飲1月、2月、3月。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)稱腎重、體重的變化；

3、原子吸收光譜石墨爐法測(cè)量血鉛、腎鉛的含量；電子顯微鏡觀察腎臟的超微病理改變；應(yīng)用免疫組化的方法檢測(cè)腎組織NF-κB、TGF-β及FN蛋白的表達(dá)情況；用RT-PCR的方法檢測(cè)腎組織中NF-KB、TGF-B及FN mRNA的表達(dá)；用ELISA的方法檢測(cè)血清IFN-γ的含量。 結(jié)論: 1.鉛能促進(jìn)FN蛋白和mRNA在腎組織中的表達(dá)。提示染鉛2月后腎組織即啟動(dòng)了纖維化的早期環(huán)節(jié)。 2.鉛能促進(jìn)NF-κB蛋白和mRNA在腎

4、組織中的表達(dá),而NF-κB可促進(jìn)腎臟纖維化,提示鉛所導(dǎo)致的腎臟纖維化與NF-KB有關(guān)。 3.鉛能促進(jìn)TGF-βmRNA在腎組織中的表達(dá),提示TGF-β也參與了鉛性腎病腎臟纖維化的發(fā)病過程,但鉛對(duì)該因子為一遲發(fā)性影 響。 4.鉛可降低血清IFN-γ含量。而IFN-γ對(duì)腎臟纖維化有保護(hù)作用,提示鉛所導(dǎo)致的腎臟纖維化與IFN-γ的降低有關(guān)。 第二章硫胺素和碘化鉀對(duì)實(shí)驗(yàn)性鉛性腎病的治療作用及對(duì)纖維化相關(guān)因子表達(dá)的影響

5、 研究背景：目前對(duì)于鉛中毒的治療主要是驅(qū)鉛治療。常見的驅(qū)鉛藥物是螯合劑，但使用螯和劑有許多副作用。首先，它可導(dǎo)致超敏反應(yīng)、白細(xì)胞減少、微量元素的丟失及腎功能衰竭等；其次，螯和劑僅供靜脈注射，且有局部刺激和產(chǎn)生過敏等不良反應(yīng)，需脫產(chǎn)定時(shí)注射，不便作預(yù)防性用藥；第三，大部分藥物不能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)的排鉛特別是軟組織中的鉛排出困難，近年對(duì)鉛作用的分子機(jī)制提示，鉛的毒性作用的靶位點(diǎn)在細(xì)胞分子上，如從分子水平給予藥物治療，預(yù)期可達(dá)到治

6、本和長(zhǎng)期防治的良好效果。 目的：首先觀察硫胺素和碘化鉀對(duì)鉛性腎病的治療作用，進(jìn)而從蛋白質(zhì)和分子水平觀察他們對(duì)纖維化相關(guān)因子核因子-κB(NF-κB)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子．B(TGF-β)、干擾素-Y(IFN-γ)及纖維連接蛋白(FN)表達(dá)的影響。 方法：SD大鼠96只適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，隨機(jī)分為12組， 每組8只，Ac、Bc、Cc組為正常對(duì)照組，分別予蒸餾水喂飲1月、2月、3月；A<,pb.、B<,pb>、C<,pb>為染鉛組，

7、分別給予O.5％的醋酸鉛喂飲1月、2月、3月；A<,vb>、B、C<,vb>為硫胺素組，在給予O.5％的醋酸鉛喂飲的同時(shí)予硫胺素3mg／100g體重，注射用水稀釋灌胃qd，時(shí)間分別為1月、2月、3月；A<,KI>、B<,KI>、C<,KI>為碘化鉀組，在給予O.5％的醋酸鉛喂飲的同時(shí)予碘化鉀3mg／100g體重，注射用水稀釋灌胃qd，時(shí)間分別為1月、2月、3月。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)稱腎重、體重變化；原子吸收光譜石墨爐法測(cè)量血鉛、腎鉛含量；

8、電子顯微鏡觀察腎臟超微病理改變；用免疫組化的方法檢測(cè)腎組織NF-к B、TGF-β及FN蛋白的表達(dá)，用RT-PCR的方法檢測(cè)腎組織NF-к B、TGF-β及FN mRNA的表達(dá)，用ELISA的方法檢測(cè)血清IFN-γ含量。 結(jié)論： 1.硫胺素和碘化鉀能拮抗鉛對(duì)大鼠生長(zhǎng)發(fā)育的影響，并有驅(qū)鉛、改善鉛性腎病超微結(jié)構(gòu)的作用，兩者效果相當(dāng)； 2．硫胺素和碘化鉀治療均可延緩鉛所導(dǎo)致的腎臟纖維化的早期啟動(dòng)，且