非鮑曼的不動桿菌的基因型鑒定與對_-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥機制研究.pdf

1、目的：探討鑒定不動桿菌各基因型，包括醋酸鈣-鮑曼不動桿菌復合體的有效方法；分析臨床分離的非鮑曼的不動桿菌的臨床分布特征及藥敏情況；檢測非鮑曼的不動桿菌的金屬β-內(nèi)酰胺酶和整合酶基因，探討其在介導非鮑曼的不動桿菌對?-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥中的作用，最終為臨床抗菌藥物治療提供合理的指導和參考。
　　方法：⑴收集蚌埠醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院、安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院自2012年2月至2013年4月無重復分離的非鮑曼的不動桿菌的40株，醋酸鈣-鮑

2、曼不動桿菌復合體20株。運用全自動細菌鑒定及藥敏分析系統(tǒng) VITEK2試卡法對臨床分離的不動桿菌進行菌種鑒定，并對20株醋酸鈣-鮑曼不動桿菌復合體進一步分析經(jīng)聚合酶鏈式反應（PCR）擴增鮑曼不動桿菌特異表達的D類碳青霉烯酶基因OXA-51、16S rRNA基因及醋酸鈣-鮑曼不動桿菌復合體各菌種特異表達的gyrB基因，以確證其準確種屬。⑵用K-B法對臨床收集的非鮑曼的不動桿菌進行藥物敏感試驗，分析非鮑曼的不動桿菌的臨床分布特征及藥物敏感情

3、況。⑶用PCR擴增?-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥基因，如：金屬β-內(nèi)酰胺酶（SIM-1、VIM-2、IMP-4）、Ⅰ-Ⅲ類整合子的整合酶基因。
　　結果：①不動桿菌屬菌種鑒定結果：60株不動桿菌經(jīng)VITEK2全自動細菌鑒定及藥敏分析系統(tǒng)鑒定為醋酸鈣-鮑曼不動桿菌復合體20株，洛菲不動桿菌29株，瓊氏不動桿菌9株，溶血不動桿菌2株。20醋酸鈣-鮑曼不動桿菌復合體經(jīng)PCR擴增16S rRNA序列分析結果示：鮑曼不動桿菌16株，醋酸鈣不動桿菌3

4、株，及1株不明確基因型不動桿菌；20醋酸鈣-鮑曼不動桿菌復合體經(jīng)PCR擴增gyrB基因結果分析為鮑曼不動桿菌16株，醋酸鈣不動桿菌3株，不動桿菌基因型13TU1株；OXA-51陽性率80％。②非鮑曼的不動桿菌臨床分布特征：44株非鮑曼的不動桿菌（4洛菲不動桿菌29株，瓊氏不動桿菌9株，溶血不動桿菌2株及自20醋酸鈣-鮑曼不動桿菌復合體分離出的3株醋酸鈣不動桿菌，1株不動桿菌基因型13TU）科室分布主要來源于心內(nèi)科、呼吸內(nèi)科、ICU。感染

5、發(fā)生的主要部位是呼吸道，構成比為65.9%；且非鮑曼不動桿菌中以洛菲不動桿菌為主，構成比占非鮑曼的不動桿菌的61.4%。③藥敏結果：44株非鮑曼的不動桿菌中3株為多耐藥菌株（2株洛菲不動桿菌及1株溶血不動桿菌，且均對β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥），17株為僅β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥，余24株為完全敏感菌株。④非鮑曼的不動桿菌金屬β-內(nèi)酰胺酶基因檢測結果：44株非鮑曼的不動桿菌中，金屬β-內(nèi)酰胺酶SIM-1陽性率20.5%（9/44），陽性菌株為

6、2株多藥耐藥洛菲不動桿菌及7株（5株洛菲不動桿菌、2株瓊氏不動桿菌）對?-內(nèi)酰胺類抗菌藥物不同程度耐藥菌株；VIM-2陽性率9.1%（4/44），多藥耐藥菌株中的1株洛菲不動桿菌、1株溶血不動桿菌及對?-內(nèi)酰胺類抗菌藥物耐藥1株洛菲不動桿菌及1株瓊氏不動桿菌攜帶VIM-2基因；IMP-4未檢測出。⑤非鮑曼的不動桿菌整合酶基因檢測結果：IntI-1陽性率11.4%(5/44)，3株多藥耐藥菌株及對?-內(nèi)酰胺類抗菌藥物耐藥菌株中的1株洛菲不

7、動桿菌、1株瓊氏不動桿菌IntI-1陽性表達； IntI-2陽性率13.6%(6/44)，陽性菌株均為對?-內(nèi)酰胺類抗菌藥物耐藥菌株，3株為洛菲不動桿菌、1株為溶血不動桿菌及2株為瓊氏不動桿菌；IntI-3未檢測出。
　　結論：⑴全自動菌種鑒定系統(tǒng)輔以分子生物學基因分型方法，如分析鮑曼不動桿菌標志性基因OXA-51、16S rRNA序列、不動桿菌屬種特異性的DNA回旋酶B亞基（GyrB）基因gyrB，可較為準確地鑒定醋酸鈣-鮑曼不

8、動桿菌復合體各個菌種，且gyrB基因在用于親緣性相近菌種的鑒定與區(qū)分方面優(yōu)于16S rRNA基因。⑵臨床分離的非鮑曼的不動桿菌以心內(nèi)科、呼吸內(nèi)科、重癥監(jiān)護病房(ICU)分離率較高，呼吸系統(tǒng)感染較為常見。且以洛菲不動桿菌為首位，值得進一步關注。⑶非鮑曼的不動桿菌的耐藥率相對較低，對臨床床用抗菌藥物仍較為敏感，但已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多耐藥菌株，需要進一步關注。⑷本地非鮑曼的不動桿菌檢測出的金屬β-內(nèi)酰胺酶主要包括：金屬β-內(nèi)酰胺酶SIM-1、VIM-2

9、，金屬β-內(nèi)酰胺酶陽性菌株對β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥率達100%，推測金屬β-內(nèi)酰胺酶在非鮑曼的不動桿菌對β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥機制中起一定作用，但存在耐藥菌株金屬β-內(nèi)酰胺酶陰性的情況，提示存在其他耐藥機制共同參與非鮑曼的不動桿菌的耐藥。首次發(fā)現(xiàn)表達SIM-1、VIM-2的洛菲不動桿菌、溶血不動桿菌、瓊氏不動桿菌。而檢測出的整合子包括Ⅰ、Ⅱ類整合子，整合子陽性菌株對β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥率達100%，推測Ⅰ、Ⅱ類整合子在介導非鮑曼的不動