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文檔簡介
1、目的: 1.探討骨保護(hù)素蛋白(OPG)對(duì)骨質(zhì)疏松及血管鈣化的作用機(jī)制,從基礎(chǔ)和臨床角度證實(shí)骨保護(hù)素蛋白在這兩種疾病發(fā)病中的作用以及相互關(guān)系;2. 探討CYP1A1基因第7外顯子中多態(tài)性位點(diǎn)與老年男性骨密度的關(guān)系。 方法:1.(1)收集來自2006年1月至2007年9月上海瑞金醫(yī)院老年科門診和住院患者;(2)提取外周血基因組DNA用于進(jìn)行基因型檢測;(3)同時(shí)測量入選者的骨密度(腰椎2~4前后位、髖關(guān)節(jié)、股骨頸、Ward's三角、
2、髖部整體)、頸動(dòng)脈IMT值、各項(xiàng)生化指標(biāo)。2.(1)由上海南方模式生物研究中心提供OPG基因剔除小鼠;(2)分離小鼠主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞并進(jìn)行原代培養(yǎng),待大部分組織塊長出細(xì)胞暈相接觸時(shí)傳代,實(shí)驗(yàn)用第3-8代細(xì)胞;(3)利用形態(tài)學(xué)及免疫熒光方法鑒定主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞;(4)分組誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞鈣化,并測定細(xì)胞鈣沉積量及細(xì)胞堿性磷酸酶(AKP)活性。 結(jié)果:1.(1)上海地區(qū)男性O(shè)PG基因啟動(dòng)子區(qū)存在950T-C單核苷酸突變位點(diǎn)
3、,按基因型分為三組(TT 型、TC型和CC型)。各組患者的一般情況以及臨床相關(guān)指標(biāo)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,具有可比性;(2)950T-C位點(diǎn)基因分布頻率符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律;(3)腰椎TT基因型組與TC及CC基因型組比較骨密度顯著下降,但三組間頸動(dòng)脈IMT無顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;2.(1)野生型小鼠與OPG基因敲除小鼠主動(dòng)脈切片比較顯示OPG-/-小鼠主動(dòng)脈血管壁平滑肌層出現(xiàn)鈣化斑塊;(2)磷濃度1.4mmol/L的培養(yǎng)基培養(yǎng)
4、OPG+/+細(xì)胞鈣沉積很少;OPG-/-細(xì)胞鈣沉積即出現(xiàn)明顯增加;當(dāng)磷濃度>2.0mmol/L時(shí),細(xì)胞鈣沉積隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長顯著增加;(3)磷濃度1.4mmol/L的培養(yǎng)基培養(yǎng),OPG+/+細(xì)胞ALP活性隨時(shí)間變化很小,OPG-/-細(xì)胞ALP活性即出現(xiàn)明顯增加;當(dāng)磷濃度>2.0mmol/L時(shí),細(xì)胞ALP活性隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長顯著增加;在相同培養(yǎng)時(shí)間內(nèi),OPG-/-細(xì)胞ALP活性明顯高于OPG+/+細(xì)胞;3.(1) CYP1A1基因A4
5、889G多態(tài)性位點(diǎn)基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡,但未發(fā)現(xiàn)C4887A多態(tài)性位點(diǎn)的存在;(2)A4889G位點(diǎn)基因型AA/AG/GG三組間以及等位基因A/G兩組間的一般情況及性激素水平無顯著性差異。(3)GG基因型的男性與AG及AA型比較,腰椎2~4前后位、Ward’s三角及髖部整體等部位的骨密度顯著降低(P<0.05);校正BMI之后差異仍然存在。 結(jié)論:1.OPG基因950T-C多態(tài)性位點(diǎn)與上海地區(qū)男性骨密度
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