一種來(lái)源于人樹突狀細(xì)胞的CaM-KIIN全長(zhǎng)新基因的克隆及其功能的初步研究.pdf

1、第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文一種來(lái)源于人樹突狀細(xì)胞的CaMKIIN全長(zhǎng)新基因的克隆及其功能的初步研究姓名：張君申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：臨床實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)指導(dǎo)教師：于嘉屏2002.6.1第一軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文一種來(lái)源于人樹突狀細(xì)胞的全長(zhǎng)新基因CaMKIlN的克隆及其功能的初步研究中文摘要人類基因組計(jì)劃是生命科學(xué)領(lǐng)域的～項(xiàng)跨世紀(jì)工程，目的在于獲得人類的全部基因組信息，揭示人類生命的奧妙及疾病的發(fā)生發(fā)展規(guī)律，最終探索出疾病治療有效方法。隨著分子生物

2、學(xué)和計(jì)算機(jī)技術(shù)、生物信息學(xué)的發(fā)展，大規(guī)模測(cè)序已成為揭示細(xì)胞基因表達(dá)譜和發(fā)現(xiàn)新基因的有效手段(1、2)。樹突狀細(xì)胞(16endriticcells，DC)是體內(nèi)重要的專職抗原提呈細(xì)胞(APC)，是機(jī)體T細(xì)胞特異免疫應(yīng)答的直接啟動(dòng)者和調(diào)控者(3，4)。為了深入認(rèn)識(shí)DC的生物學(xué)功能，’闡明其生物學(xué)作用的分子機(jī)理，，本實(shí)驗(yàn)室建立了樹突狀細(xì)胞eDNA基因文庫(kù)的隨機(jī)大規(guī)模測(cè)序體系(5)。本文所研究的CaMKIlN就是在隨機(jī)測(cè)序篩選人樹突狀細(xì)胞的cD

3、NA文庫(kù)時(shí)獲得的一__’__一條全長(zhǎng)新基因。一、CaMKIlN全長(zhǎng)新基因的克隆與組織分布分析r，根據(jù)Sanger雙脫氧鏈終止原理，利用BigDyeTermination測(cè)序試劑盒和兩臺(tái)AB“1377DNA全自動(dòng)DNA測(cè)序儀，對(duì)人樹突狀細(xì)胞eDNA文庫(kù)克隆的5’端進(jìn)行大規(guī)模隨機(jī)測(cè)序，將測(cè)得的基因序列與基因數(shù)據(jù)庫(kù)(Genebank／EMBL)進(jìn)行比較篩選，篩選到一條全長(zhǎng)新基因鈣離子／鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶II抑制性蛋白(calcium／cal

4、modulindependentproteinkinaseIIinhibitorprotein，CaMKIIN)。該基因全長(zhǎng)為591bp，含有240bp的完整開放性讀框(ORF)，編碼含79個(gè)氨基酸的蛋白，根據(jù)Kyte—Doolitte疏水性分析和GCG軟件預(yù)測(cè)，該蛋白親水性較強(qiáng)，蛋白序列不包含糖基化位點(diǎn)，沒有特別的功能性結(jié)構(gòu)域，蛋白質(zhì)的分子量為865769Dalton，等電點(diǎn)為516。BLAST分析表明其與已知基因不同，蛋白水平與大鼠