布格呋喃、洛伐他汀、加蘭他敏的微生物轉(zhuǎn)化;瑞香狼毒細(xì)胞培養(yǎng)物化學(xué)成分研究.pdf

1、Ⅰ、布格呋喃，洛伐他汀，加蘭他敏的微生物轉(zhuǎn)化
　　 微生物轉(zhuǎn)化是利用微生物細(xì)胞酶系統(tǒng)對(duì)外源性底物進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾的方法，其實(shí)質(zhì)是酶催化反應(yīng)，具有選擇性強(qiáng)、效率高、反應(yīng)條件溫和、副產(chǎn)物少且綠色環(huán)保等特點(diǎn)，是化合物結(jié)構(gòu)修飾的一種有效方法。尤其對(duì)于結(jié)構(gòu)復(fù)雜或剛性結(jié)構(gòu)的天然產(chǎn)物而言，微生物轉(zhuǎn)化更有其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，能實(shí)現(xiàn)很多化學(xué)合成無(wú)法修飾的反應(yīng)，且選擇性強(qiáng)。利用生物體中豐富多樣的酶對(duì)化合物進(jìn)行多種催化反應(yīng)，可獲得結(jié)構(gòu)多樣、活性更好的衍生物，為

2、新藥研發(fā)提供先導(dǎo)化合物：另外，微生物含有動(dòng)物或人體肝微粒體P450酶系的同工酶，可模擬哺乳動(dòng)物藥物代謝，得到哺乳動(dòng)物難以獲得的代謝產(chǎn)物并進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定、活性及毒性評(píng)價(jià)。
　　 1．采用31株不同微生物菌株對(duì)抗焦慮新藥布格呋喃(AF-5)進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化，發(fā)現(xiàn)多種微生物均能轉(zhuǎn)化AF-5。選取產(chǎn)物豐富、轉(zhuǎn)化率較高的雅致小克銀漢霉AS3.3402、刺孢小克銀漢霉AS3.3400以及藍(lán)色犁頭霉AS3.3538三株菌株對(duì)AF-5進(jìn)行放大轉(zhuǎn)化研究

3、，分別獲得12、5、2個(gè)轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，均為新化合物。產(chǎn)物類型包括：?jiǎn)瘟u基取代、雙羥基取代、羰基取代。在確定以上化合物絕對(duì)構(gòu)型的過(guò)程中，采用了一維NOE差譜、CD光譜和Rh2(OCOCF3)4螯合CD實(shí)驗(yàn)、Mosher’s法以及活性MnO2選擇性氧化烯丙位羥基為羰基等方法。在大鼠腦突觸體再攝取[3H]-5-HT實(shí)驗(yàn)中，化合物1-7、1-8的抑制率分別達(dá)到57％與50％;大鼠腦突觸體再攝取[3H]-NE實(shí)驗(yàn)中，化合物1-7、1-9、1-10和1

4、-11的抑制率分別達(dá)到64.9％、60.5％、65.3％和66.9％。對(duì)缺糖缺氧(OGD)損傷PC12細(xì)胞的保護(hù)作用評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)中，化合物1-3、1-5、1-7、1-7a、1-12、1-16在10μM濃度下對(duì)細(xì)胞存活具有明顯保護(hù)作用，尤其化合物1-3和1-5細(xì)胞存活率分別上升至80.9±2.3％和77.3±0.5％。
　　 采用HPLC-UV以及LC-MS方法比較了AF-5的微生物轉(zhuǎn)化與大鼠肝微粒體代謝輪廓，結(jié)果表明：微生物轉(zhuǎn)化能夠

5、產(chǎn)生動(dòng)物的代謝產(chǎn)物，如產(chǎn)物1-1、1-3、1-5、1-12，進(jìn)一步顯示微生物藥物代謝可以模擬哺乳動(dòng)物的藥物代謝。
　　 2．洛伐他汀(lovastatin，2-1)經(jīng)白僵菌Beauveria bassianaAS3.4270靜息細(xì)胞轉(zhuǎn)化，產(chǎn)生了5個(gè)代謝產(chǎn)物，采用各種波譜學(xué)方法對(duì)產(chǎn)物結(jié)構(gòu)進(jìn)行了鑒定,分別為：(IS,2S,2′S,6R,8S,8aR,11R,13R)-(1,2,6,7,8,8a-hexahydro-11,13-dih

6、ydroxy-2,6-dimethyl-8-(2-methylbutyryl)oxy-1-naphthalene heptanoic acidmethyl ester(2-2),(3′S)-3′-hydroxy-lovastatin(2-3),(3′R)-3′-hydroxy-lovastatin(2-4),(1S,2S,2′S,3′S,6R,8S,8aR,11R,13R)-(1,2,6,7,8,8a-hexahydro-11,13-d

7、ihydroxy-2,6-dimethyl-8-(2-methyl-3-hydroxy-butyryl)-oxy-1-naphthalene heptanoic acid methyl ester(2-5),(1S,2S,2′S,3′R,6R,8S,8aR,11R,13R)-1.2,6,7,8,8a-hexahydro-11,13-dihydroxy-2,6-dimethyl-8-(2-methyl-3-hydroxy-butyryl)

8、oxy-1-naphthalene heptanoic acid methyl ester(2-6)。發(fā)生的反應(yīng)包括羥基化、內(nèi)酯環(huán)水解、O-甲基化。體外活性測(cè)試表明：化合物2-4對(duì)3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶具有較好的抑制活性，其IC50為2.2μM，抑制率達(dá)81.4％。
　　 3．在試驗(yàn)的37株不同微生物中，僅發(fā)現(xiàn)細(xì)菌imm-21、AS1.181能夠?qū)alantha-mlne進(jìn)行轉(zhuǎn)化反應(yīng)，并分別得到

9、2和3個(gè)轉(zhuǎn)化產(chǎn)物。轉(zhuǎn)化反應(yīng)類型包括N-去甲基、N-氧化、重排、雙鍵還原以及羰基取代等類型：抗抑郁實(shí)驗(yàn)活性評(píng)價(jià)結(jié)果顯示以上化合物無(wú)顯著的AChE抑制活性。
　　 采用HPLC-UV以及LC-MS方法比較galanthalmine的微生物轉(zhuǎn)化與大鼠肝微粒體代謝輪廓，結(jié)果表明：微生物轉(zhuǎn)化能夠產(chǎn)生動(dòng)物的代謝產(chǎn)物，如產(chǎn)物3-1和3-2，進(jìn)一步顯示微生物藥物代謝可以模擬哺乳動(dòng)物的藥物代謝。
　　 Ⅱ、瑞香狼毒細(xì)胞培養(yǎng)物化學(xué)成分研究<

10、br>　　 采用常壓與減壓硅膠柱色譜、半制備HPLC、Sephadex LH-20等多種色譜方法從瑞香狼毒細(xì)胞培養(yǎng)物85％的乙醇提取物分離得到了24個(gè)化合物，通過(guò)其理化性質(zhì)和各種波譜技術(shù)(UV,IR，1DNMR，2DNMR，MS)對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了鑒定，其中化合物4-1*～4-7*為新化合物,4-8～4-24為己知化合物?；衔?-3～4-8為倍半萜類化合物；化合物4-19為環(huán)二肽類化合物；4-24為甾醇類，其余均為木脂素類化合物。這24