編碼糖蛋白B的裸基因疫苗誘導(dǎo)單純皰疹病毒I型感染小鼠的體液和細(xì)胞免疫.pdf

1、目的：經(jīng)尾靜脈注入編碼HSV-1 gB的pDNA轉(zhuǎn)染給小鼠，以此來驗證水動力學(xué)注射接種法DNA疫苗提高轉(zhuǎn)基因有效表達(dá)，基因疫苗治療感染性疾病的有效性，分析基因疫苗誘導(dǎo)的抗病毒免疫反應(yīng)。
　　方法：采用血管內(nèi)注射方法，將含有不同劑量、不同pDNAs的生理鹽水注入Balb/c小鼠體內(nèi)，一周后再次免疫。觀察不同組合pDNA進(jìn)行免疫的實驗組和對照組動物受到致死劑量HSV-Ⅰ感染后生存率差異。通過潛伏感染的檢測，血清中細(xì)胞因子濃度的測定，細(xì)

2、胞毒毒性反應(yīng)的測定以及中和實驗來評價免疫效果。
　　結(jié)果：
　　1.接種HSV-1 gB表達(dá)質(zhì)粒（pG.gB）的小鼠，與對照組相比，5μg pG.gB免疫組生存率顯著提高；5μg免疫組與3μg和1μg的pG.gB免疫組生存率相比較，存在顯著差異。
　　2.接種含有EBNA1基因和orip序列的HSV-1 gB表達(dá)質(zhì)粒（pGEG.gB）的小鼠，與對照組相比，5μg pG.gB免疫組生存率顯著提高；5μg免疫組與3μg和1

3、μg的pG.gB免疫組生存率相比較，亦存在顯著差異，但是與pG.gB免疫組比較生存率無顯著差異。
　　3.與對照組相比，5μg的pG.gB或pGEG.gB誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體的效價有顯著差異。在給予1μg pG.gB或 pGEG.gB同樣顯示了對 HSV-1斑塊形成的抑制作用，但是抑制率明顯低于給予5μg pDNAs組。
　　4.與同樣的效應(yīng)細(xì)胞相比，5μg的pGEG.gB免疫組對P815.gB細(xì)胞有顯著的細(xì)胞毒性作用，1μg

4、pGEG.gB免疫的小鼠并沒有顯示對P815.gB殺傷活性的顯著增加。脾細(xì)胞增殖實驗結(jié)果顯示，pGEG.gB-免疫小鼠的脾細(xì)胞增殖反應(yīng)顯著高于pG.gB免疫的小鼠。
　　5.應(yīng)用ELISA法分析，與對照組相比pG.gB和 pGEG.gB免疫后的小鼠血清中IL-12和IFN-γ濃度均顯著升高。但是不同劑量的各實驗組的IL-12和IFN-γ濃度無顯著差異。
　　結(jié)論：
　　1.水流動力學(xué)注射方法是一種簡便、有效的體內(nèi)gB基