2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡(jiǎn)介

1、研究背景:
  阿爾茲海默病(AD)是一種起病隱匿且慢性進(jìn)行性發(fā)展的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病,以記憶力下降和認(rèn)知功能障礙為主要臨床表現(xiàn)。如今AD已成為老年人癡呆最常見的病因,并隨著我國老齡化程度的加劇和日益增高的發(fā)病率,逐漸成為繼心血管病、腫瘤與腦卒中之后威脅老年人健康的第四大殺手,給社會(huì)和家庭帶來沉重的負(fù)擔(dān),因此如何遏制AD的發(fā)生發(fā)展成為亟待解決的問題。已知AD主要病理改變是細(xì)胞外老年斑沉積,細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)原纖維纏結(jié)及腦內(nèi)慢性炎癥。β淀粉

2、樣蛋白(Beta amyloid protein,Aβ)是由β分泌酶(β secretion enzyme,BACE1)等水解淀粉樣前體蛋白(amyloid precusor protein,APP)而產(chǎn)生的一種非特異性結(jié)合蛋白。近年研究顯示,Aβ不僅能聚集參與AD特征性病理改變即老年斑的形成,而且在早期能與晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(RAGE)結(jié)合,激活相應(yīng)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路,進(jìn)而引發(fā)神經(jīng)元毒性、氧化應(yīng)激與炎性等級(jí)聯(lián)反應(yīng),成為各種原因誘發(fā)A

3、D的共同通路,參與不同階段的神經(jīng)損傷,最終導(dǎo)致記憶等認(rèn)知方面的下降。因此Aβ是AD形成和發(fā)展的關(guān)鍵因素,減少Aβ的生成有希望成為阻斷AD進(jìn)程的有效手段。
  糖基化終產(chǎn)物((advaneed glycation end products,AGEs)是蛋白質(zhì)的氨基與還原糖的羰基在無酶不可逆條件下形成的不溶性聚合物,高糖狀態(tài)及老齡人體內(nèi)AGEs增加。近年來有大量研究證據(jù)表明,AGEs參與糖尿病中(腎、腦、足、視網(wǎng)膜及骨等)各種靶器官的

4、損害。研究亦表明2型糖尿病是AD發(fā)生的危險(xiǎn)因素之一,AD可能與糖尿病一樣,是一種內(nèi)分泌紊亂導(dǎo)致的代謝性疾病。Carvalh發(fā)現(xiàn)糖尿病大鼠皮層和海馬區(qū)Aβ明顯增多,并且在AD動(dòng)物模型中,早期老年斑周圍也均有AGEs表達(dá),說明AGEs、糖尿病及AD三者之間有著密切的聯(lián)系。不僅如此,研究者發(fā)現(xiàn)隨著AD動(dòng)物模型病程的進(jìn)展,AGEs與Aβ均聚集逐漸增多,進(jìn)一步提示AGEs是導(dǎo)致AD病理改變的主要因素之一,且貫穿于AD病程始末。糖基化終產(chǎn)物受體(r

5、eceptor for advanced glycation endproducts,RAGE)是AGEs和Aβ的共同受體,廣泛存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的細(xì)胞膜上,在AD患者腦中高表達(dá)。RAGE能介導(dǎo)Aβ通過血腦屏障(blood brain barrier,BBB)加劇Aβ的聚集和神經(jīng)纖維的纏結(jié),并通過與其配體AGEs或Aβ結(jié)合活化小膠質(zhì)細(xì)胞從而引發(fā)炎癥反應(yīng),導(dǎo)致炎癥因子正反饋上調(diào)RAGE的自身表達(dá),形成惡性循環(huán),使神經(jīng)損傷進(jìn)一步擴(kuò)大。目前已

6、有研究證實(shí),RAGE與其配體AGEs結(jié)合引起的一系列反應(yīng)是導(dǎo)致糖尿病腦損害和AD發(fā)生血管病變及認(rèn)知障礙的共同通路,同時(shí)AGEs也在衰老中起重要作用。因此阻斷RAGE與AGEs的結(jié)合,可能會(huì)在很大程度上遏制上述疾病尤其是AD的進(jìn)展。上述研究提示RAGE可能是治療AD的有效靶點(diǎn)。當(dāng)前阻斷RAGE的手段主要有RAGE抗體及sRAGE,且體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)均取得一定效果,但由于二者皆不能通過BBB作用于腦內(nèi)的RAGE來干擾AGEs的代謝,因此迄今為止

7、仍無有效抑制RAGE的方法。此外,目前的治療AD藥物臨床療效并不十分理想。新近研發(fā)的RAGE阻斷劑(PF-04494700)在臨床前期實(shí)驗(yàn)的確能改善AD癥狀,但由于毒副作用太大而停用。因此,研發(fā)既能通過血腦屏障又安全高效的RAGE阻斷藥物,具有更重要的意義。FPS-ZM1是由Deane等首次人工合成的無毒性RAGE特異性阻斷劑。通過用FPS-ZM1干預(yù)APP轉(zhuǎn)基因小鼠發(fā)現(xiàn),該藥能通過血腦屏障作用于腦內(nèi)RAGE,從而阻斷RAGE與Aβ的結(jié)

8、合引發(fā)的炎性反應(yīng),并能阻斷外周Aβ與血腦屏障上的RAGE結(jié)合進(jìn)入中樞,因此該藥可能成為理想的阻斷RAGE的新藥物。
  已知AGEs-RAGE是參與AD發(fā)生發(fā)展的重要因素,F(xiàn)PS-ZM1對(duì)RAGE介導(dǎo)的多條損傷通路有較強(qiáng)的抑制作用。已有研究證明FPS-ZM1對(duì)APP轉(zhuǎn)基因AD模型有明顯神經(jīng)保護(hù)作用,然而,F(xiàn)PS-ZM1是否對(duì)AGEs誘導(dǎo)的腦神經(jīng)損傷有保護(hù)作用未見報(bào)道。因此,我們?cè)O(shè)計(jì)該課題,通過建立AGEs腦損傷動(dòng)物模型,進(jìn)一步研究

9、AGEs-RAGE通路的腦損傷機(jī)制及FPS-ZM1阻斷RAGE的腦保護(hù)效果和可能機(jī)制。
  目的:
  (1)明確AGEs損傷機(jī)制,探討不同損傷通路之間可能的聯(lián)系。
  (2)探討FPS-ZM1對(duì)AGEs腦損傷所致海馬區(qū)Aβ異常代謝的影響。
  (3)探討FPS-ZM1對(duì)AGEs腦損傷所致海馬區(qū)炎性反應(yīng)的作用機(jī)制。
  研究方法:
  (1)建立AGEs腦損傷模型,大鼠麻醉后固定于立體定位儀上,常規(guī)備

10、皮消毒,于顱頂部正中切開皮膚。參考Miguel-Hidalg等的方法,用微量注射泵海馬注射法,兩側(cè)海馬內(nèi)注射AGEs各5μl,建立AGEs腦損傷模型。
  (2)分組及造模:將40只大鼠隨機(jī)分4組(每組各10只):
  a.生理鹽水組(NC組):海馬內(nèi)注射生理鹽水。
  b.FPS-ZM1對(duì)照組:海馬內(nèi)注射生理鹽水。
  c.AGEs組:海馬內(nèi)注射AGEs。
  d.FPS-ZM1組:海馬內(nèi)注射AGEs。<

11、br>  (3)干預(yù)方法:FPS-ZM1組和FPS-ZM1對(duì)照組:造模前1周以1mg/kg/d注射FPS-ZM1,并連續(xù)4周給藥;AGEs組、NC組:腹腔注射相同體積生理鹽水。
  (4)觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法:造模3周后進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn),在測(cè)試期記錄每次找到平臺(tái)的時(shí)間(escape latency,EL)。水迷宮測(cè)試完成后,用免疫組化檢測(cè)各組大鼠海馬TNFα的蛋白表達(dá),通過Western blot半定量檢測(cè)各組大鼠海馬區(qū)R

12、AGE,β分泌酶、APP、CD11b,p-NF-κB和TNFα的表達(dá),用ELISA法定量檢測(cè)各組大鼠海馬區(qū)Aβ1-40,Aβ1-42的表達(dá)。
  結(jié)果:
  (1)Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)
  AGEs組逃避潛伏期較NC組、FPS-ZM1對(duì)照組明顯延長(zhǎng)(P<0.01),F(xiàn)PS-ZM1組逃避潛伏期較AGEs組明顯縮短(P<0.01),F(xiàn)PS-ZM1組逃避潛伏期較NC組、FPS-ZM1對(duì)照組無明顯改變(P>0.05)。

13、>  (2)免疫組化檢測(cè)大鼠海馬區(qū)TNFα的表達(dá)
  與其他各組比較,AGEs組大鼠海馬組織可見TNFα蛋白呈棕褐色陽性表達(dá),著色最深;FPS—ZM1組免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞數(shù)少,染色淺;NC組、FPS—ZM1對(duì)照組海馬區(qū)幾乎沒有陽性表達(dá),且較AGEs組和FPS—ZM1組細(xì)胞排列緊密,細(xì)胞無明顯萎縮現(xiàn)象。
  (3)Western blot半定量檢測(cè)各組大鼠海馬區(qū)RAGE、CD11b,pNF-κB、TNFα和β分泌酶、APP的表達(dá)

14、
  AGEs組RAGE、CD11b,pNF-κB、TNFα和β分泌酶、APP的表達(dá)明顯高于NC組、FPS-ZM1對(duì)照組(P<0.01);與AGEs組比較,F(xiàn)PS-ZM1組上述指標(biāo)表達(dá)明顯降低(P<0.01);與NC組、FPS-ZM1對(duì)照組比較,F(xiàn)PS-ZM1組RAGE表達(dá)無明顯差異(P>0.05),但除RAGE外其他指標(biāo)表達(dá)增強(qiáng)(P<0.01)。
  (4)用Elisa檢測(cè)各組大鼠海馬區(qū)Aβ1-40,Aβ1-42
 

15、 AGEs組海馬區(qū)Aβ1-40和Aβ1-42的濃度均較NC組、FPS-ZM1對(duì)照組明顯增高(P<0.01);與AGEs組,F(xiàn)PS-ZM1組Aβ1-40和Aβ1-42的濃度明顯降低(P<0.01),與NC組、FPS-ZM1對(duì)照組比較,F(xiàn)PS-ZM1組Aβ1-40和Aβ1-42的濃度升高(P<0.01)
  結(jié)論:
  (1)AGEs能通過誘導(dǎo)海馬區(qū)糖基化終末產(chǎn)物受體(RAGE)的高表達(dá),上調(diào)p-NF-κB并可能激活BACE1,

16、促進(jìn)Aβ1-40,Aβ1-42生成增加。
  (2)RAGE受體阻斷劑FPS-ZM1能通過阻斷細(xì)胞上RAGE,減少腦組織NF-κB的激活,從而減輕腦AGEs損傷引起的炎性反應(yīng)。
  (3)FPS-ZM1可能通過抑制細(xì)胞上RAGE,下調(diào)p-NF-κB,進(jìn)而降低BACE1的活性和APP蛋白水平,最終減少Aβ1-40,Aβ1-42生成,改善AGEs腦損傷大鼠的認(rèn)知水平。該實(shí)驗(yàn)證實(shí)FPS-ZM1能減少Aβ生成并有抗炎作用,提示其腦保

17、護(hù)的多效性,為今后該藥的防治AD提供有利理論依據(jù)。該藥可能將成為抑制阿爾茨海默病的有效措施。
  意義:
  本實(shí)驗(yàn)通過應(yīng)用腦立體定位技術(shù)建立大鼠AGEs海馬損傷模型,證實(shí)AGEs-RAGE通路能通過上調(diào)p-NF-κB并激活BACE1,促進(jìn)Aβ生成增加,且RAGE阻斷劑FPS-ZM1能抑制AGEs模型組海馬區(qū)Aβ生成及炎癥反應(yīng),進(jìn)一步證實(shí)AGE-RAGE通路是參與AD發(fā)生發(fā)展的重要因素,驗(yàn)證了RAGE是治療AD的有效靶點(diǎn),F(xiàn)

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