中國野生葡萄SBP基因克隆與序列分析.pdf

1、葡萄白粉病(Uncinula necator)是嚴重危害歐洲葡萄的真菌病害之一。中國葡萄屬野生種對真菌病害具有豐富多樣的抗性。如何有效地利用這些種質(zhì)中的抗病基因，改良現(xiàn)有的歐洲葡萄栽培品種，實現(xiàn)抗病與品質(zhì)結(jié)合，是葡萄育種家長期攻克的目標，也是我們從事的重要攻關(guān)課題。為了研究中國野生葡萄抗白粉病基因，本課題組采用mRNA差異顯示技術(shù)(mRNA differential display reverse transcription-PCR，D

2、DRT-PCR)進行了中國野生葡萄高抗葡萄白粉病的華東葡萄(V.pseudoreticulata)白河-35-1在白粉病病原菌侵染誘導下抗病基因克隆的研究，獲得了抗白粉病基因差異表達的cDNA片段10個，BLAST分析表明，在白粉病病原菌侵染后表達而對照不表達的cDNA片段T11GG/B0324-292(GenBank登錄號：DT725418)與擬南芥SBP(SQUAMOSA promoter binding protein，SBP)基

3、因有較高的同源性，說明獲得的cDNA片段T11GG/B0324-292是中國野生葡萄SBP基因的一段cDNA序列。本研究就是在獲得中國野生葡萄SBP基因cDNA片段T11GG/B0324-292的基礎上，采用cDNA末端快速擴增技術(shù)(RACE)并通過生物學信息軟件分析獲得了與葡萄抗白粉病基因相關(guān)的差異表達cDNA片段及其序列，并對序列進行了同源性比較分析。 主要研究結(jié)果： 1.中國野生葡萄白河-35-1 SBP基因3’端

4、cDNA克隆與序列分析：在獲得中國野生葡萄SBP基因cDNA片段T11GG/B0324-292的基礎上。通過RACE技術(shù)，獲得了華東葡萄白河-35-1VpSBP基因的3’端cDNA序列，1177bp，同源性分析表明，VpSBP 3’cDNA核苷酸序列與歐洲葡萄基因組高度同源，與擬南芥啟動子結(jié)合蛋白家族基因如SPL1、SPL2有較高的同源性。 2.中國野生葡萄白河-35-1 SBP基因cDNA全長序列的克隆與分析表明：在獲得中國野

5、生葡萄SBP基因cDNA片段T11GG/B0324-292的基礎上，設計特異引物，通過RACE技術(shù)，獲得了華東葡萄白河-35-1VpSBP基因的完整cDNA序列，全長2566bp組成，命名為VpSBP。具有完整序列的開放閱讀框架，編碼640個氨基酸，核苷酸與氨基酸序列分析表明，VpSBP基因其它植物SBP基因核苷酸有74％-87％的同源性，其中與擬南芥核苷酸與氨基酸序列均在70％以上。 3.葡萄總RNA的提取。改進的SDS/酚法