小蓬竹根際土壤可培養(yǎng)微生物及其酶活性研究.pdf

1、小蓬竹作為貴州喀斯特山地適生性竹種，在IUCN紅色名錄中，被定為極危種，對(duì)喀斯特地區(qū)水源涵養(yǎng)、水土保持、養(yǎng)分平衡等生態(tài)功能的實(shí)現(xiàn)起著重要作用。本文以羅甸縣小蓬竹根際土壤為研究對(duì)象，采用稀釋平板法，挑選菌落形態(tài)差異的菌株，分離純化小蓬竹根際土壤細(xì)菌、真菌和放線菌，對(duì)其16S rDNA（細(xì)菌、放線菌）、ITS rDNA（真菌）序列進(jìn)行分析構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，研究根際土壤可培養(yǎng)微生物多樣性。同時(shí)，對(duì)小蓬竹根際土壤相關(guān)理化性質(zhì)進(jìn)行了研究，為小蓬竹的

2、保護(hù)以及喀斯特山地土壤微生物多樣性研究，提供一定的理論依據(jù)和技術(shù)支撐。
　　主要研究結(jié)果如下：
　　（1）小蓬竹根際土壤酶研究發(fā)現(xiàn)，過(guò)氧化氫酶活性8.74mL KMnO4?g-1?min-1；蔗糖酶的活性表示為2.64mg?g-1?d-1；脲酶的活性為0.04mg NH3-N?g-1?d-1；蛋白酶的活性表示為0.10mg NH2-N?g-1?d-1；堿性磷酸酶的活性高于中性磷酸酶的活性，分別為7.97mg P2O5?g-1

3、?d-1、6.11mg P2O5?g-1?d-1。
　　（2）小蓬竹根際土壤微生物數(shù)量為細(xì)菌數(shù)量＞放線菌數(shù)量＞真菌數(shù)量。每克干土中所含細(xì)菌、真菌、放線菌的平均數(shù)量分別為8.32×107 cfu·g-1、2.32×106 cfu·g-1、9.19×105 cfu·g-1。
　?。?）采用稀釋平板法分離小蓬竹根際土壤微生物，共獲得菌落表型差異的細(xì)菌41株、放線菌20株、真菌33株。16S rDNA有效序列進(jìn)行BLAST顯示，41

4、株細(xì)菌可劃分為26個(gè)分類(lèi)單元、放線菌可劃分為15個(gè)分類(lèi)單元均為鏈霉菌屬（Streptomyces）；真菌的ITS rDNA有效序列分析，可劃分為24個(gè)分類(lèi)單元。僅有1株真菌BLAST比對(duì)相似度僅為75％，可能為新種或?qū)?，其余菌株相似性均?7%。細(xì)菌和真菌的Shannon-Wiener多樣性指數(shù)H分別為1.0679、2.2180，豐富度指數(shù)S分別為7、12，均勻度指數(shù)J分別為0.5488、0.8926，及優(yōu)勢(shì)度指數(shù)D分別為0.5217、

5、0.1295。
　?。?）小蓬竹根際土壤細(xì)菌、放線菌基于16S rDNA序列建立系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)表明，29株細(xì)菌屬于厚壁菌門(mén)（Firmicutes）（70.73%）（按單元種類(lèi)數(shù)計(jì)算百分比），11株屬于變形菌門(mén)（Proteobacteria）（26.83%），1株屬于擬桿菌門(mén)（Bacteroidetes）2.44%，其中芽孢桿菌屬（Bacillus）占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)；分離獲得的20株放線菌均為鏈霉菌屬。ITS rDNA系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)分析，小蓬竹根

6、際土壤真菌類(lèi)群子囊菌門(mén)類(lèi)群（占真菌總菌株數(shù)的96.97%），青霉菌屬（Penicillium）、木霉屬(Trichoderma)、曲霉屬（Aspergillus）占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)，占總菌株數(shù)51.51%，只有1株真菌屬于擔(dān)子菌門(mén)的菌屬（Perenniporia），占真菌總菌株數(shù)的3.03%。
　　（5）小蓬竹根際土壤中微生物的總數(shù)較多，細(xì)菌的數(shù)量上占優(yōu)勢(shì)，真菌的多樣性指數(shù)較高，放線菌僅為1個(gè)屬但種類(lèi)較多，總體上小蓬竹根際土壤中含有較為豐