小鼠MCMV先天感染模型的構(gòu)建及神經(jīng)系統(tǒng)感染狀況的觀察.pdf

1、目的:
　　 建立小鼠巨細胞病毒（MCMV）先天感染模型，并觀察其腦組織的病理變化及感染狀況。
　　 方法:
　　 1）MCMV毒株制備及感染性滴度的測定：剖宮取出孕中晚期BALB/c 胎鼠，制備鼠胚成纖維細胞（MEF）；擴增MCMV RM461 病毒株，用蝕斑法測定病毒滴度；稀釋至造模所需濃度（1×103 PFU/μL）備用；
　　 2）MCMV 先天感染模型的構(gòu)建：取孕11～13.5d（E11～13.

2、5d）的BALB/c 鼠，麻醉后逐個孕囊行羊膜腔內(nèi)病毒接種（RM461 病毒懸液1μL，病毒量1×103PFU），小心復位后關(guān)腹；對照組羊膜腔內(nèi)注射DMEM 培養(yǎng)液1μL。單獨飼養(yǎng)5d后處死孕鼠，剖宮取出胎鼠，麻醉處死，取胎鼠腦組織制作冰凍切片；
　　 3）胎腦組織病理改變及病毒抗原檢測：腦組織切片常規(guī)HE 染色，光鏡下觀察病理學變化；采用免疫酶組化及免疫熒光法檢測腦組織中的MCMV 早期抗原。
　　 結(jié)果:
　　

3、 1）成功擴增MCMV RM461 毒株，測得感染性病毒滴度為3.27×107PFU/mL；
　　 2）成功構(gòu)建MCMV 先天感染模型。感染組和對照組的胎鼠存活率分別為71.9％和76.7％。與對照組相比，羊膜腔內(nèi)接種MCMV 病毒對胎鼠存活率、吸收胎率、死胎率及胎鼠頭部重量無明顯影響，但可致胎鼠體重降低；
　　 3）腦組織病理學變化：對照組腦組織未見有結(jié)構(gòu)異常；感染組出現(xiàn)腦室、腦溝回發(fā)育不良，神經(jīng)細胞水腫，腦室區(qū)、腦