枇杷葉三萜酸對慢性支氣管炎防治作用的部分機制研究.pdf

1、慢性支氣管炎(chronic bronchitis，CB)是一種常見的慢性非特異性呼吸系統(tǒng)疾病，主要臨床特征為反復發(fā)作的咳嗽、咳痰或伴喘息。其發(fā)病率高，病情反復，可并發(fā)阻塞性肺氣腫，甚至肺動脈高壓、肺原性心臟病等。目前認為，大氣污染、吸煙、病原體感染及過敏因素等與慢性支氣管炎的發(fā)病密切相關，但發(fā)病后的機體免疫功能狀態(tài)則影響了慢性支氣管炎的發(fā)生和發(fā)展。因此，糾正或調節(jié)機體免疫功能紊亂可能是防治慢性支氣管炎的重要手段之一。 慢支的治

2、療，目前應用較多著眼于抗炎、鎮(zhèn)咳、平喘作用的研究，但尚無療效很滿意的藥物，而通過使用改善機體免疫功能狀態(tài)的免疫調節(jié)藥物，尤其是具有免疫調節(jié)作用的中藥來減少細胞因子、炎癥介質等促炎因素的產生，從而抑制慢支炎癥進展，可能是慢支治療的新思路。枇杷葉是薔薇科枇杷屬枇杷Eriobotryajaponica(Thunb)Lindl的葉，一直是我國傳統(tǒng)醫(yī)藥治療呼吸道炎癥性疾病的常見中藥之一，本課題組前期在國家自然科學基金資助下(NO:30371766

3、)證實枇杷葉的有效活性部位為三萜酸。枇杷葉三萜酸(triterpene Acids of Loquat Leaf,TAL)有高效、低毒的作用特征，并具有明顯的抗炎及免疫調節(jié)作用，對慢支具有較理想的防治作用。肺泡巨噬細胞(alveolar macrophages，AM)是肺部炎癥反應細胞因子、生長因子、炎癥介質、氧自由基的重要來源，是肺內重要的防御、保護和調節(jié)細胞。AM的激活是肺部炎癥反應的重要始動因素。前期研究表明TAL灌胃給藥可明顯降

4、低慢支大鼠肺組織勻漿中TNF-a、IL-8、IL-1水平，5升高IL-10的表達，并對慢支大鼠氣道粘膜上皮細胞NF-kB、ICAM-1的蛋白表達具有一定的抑制作用。此外TAL能明顯抑制慢支大鼠AM自由基的產生，抑制炎癥介質PGE2及LTB4的合成及釋放。一氧化氮(NO)是一多功能分子，在呼吸系統(tǒng)的生理和病理過程中起重要作用，因此研究TAL對其是否具有藥理作用也顯得尤為關鍵。引外對于AM等細胞激活的分子機制的目前尚不明確。鑒于MAPK信號

5、傳導通路在炎癥反應中的重要作用，本課題旨在前期研究的基礎上，以AM為平臺，MAPK信號通路為研究對象，研究慢支大鼠AM MAPK信號傳導通路并探討TAL對其信號傳導通路的影響，從而進一步闡明TAL對慢性支氣管炎防治作用的細胞分子機制，為將其開發(fā)為治療慢支的新藥提供試驗依據(jù)。課題為國家自然科學基金資助項目(NO：30572355)。主要研究內容包括以下三個方面： 1.枇杷葉三萜酸對慢性支氣管炎大鼠肺泡巨噬細胞一氧化氮合酶及一氧化

6、氮表達的影響復制大鼠慢支模型，通過TAL灌胃給藥治療，觀察TAL對CB大鼠AM iNOS表達、活性及NO釋放的影響。結果顯示：TAL抑制CB大鼠AM iNOS的表達及其活性，從而減少NO的釋放，這可能是其對慢支的治療與防治作用機制之一。 2.慢支大鼠肺泡巨噬細胞內MAPK信號傳導通路及其他通路的關系分別應用MAPK通路上游信號蛋白(PTK,PI3K, Akt，PKC)的特異性阻滯劑預處理AM，觀察下游蛋白磷酸化水平，以確定轉錄前

7、調節(jié)相關信號蛋白。結果顯示：Genistein可以不同程度的抑制PKC、PI3K/Akt、MAPK通路磷酸化的程度；LY294002可以抑制PI3K/Akt磷酸化的水平，同時誘導p-p38、p-JNK的高表達，對PKC/ERK這條經(jīng)典途徑的磷酸化也有一定的激活作用；Calphostin C阻斷PKC的磷酸化，對p-ERK水平有較大影響，而對p-p38和p-JNK則影響不大。推出大鼠慢支模型大鼠AM中LPS信號轉導MAPK通路可能為PTK

8、-PI3K/Akt-JNK/p38或者PTK-PI3K-PKC-ERK。 3.枇杷葉三萜酸(TAL)治療慢性支氣管炎的作用位點研究基于第二部分的研究，進一步探討TAL對MAPK通路的轉錄前信號蛋白的作用環(huán)節(jié)。發(fā)現(xiàn)TAL對p-p38，p-JNK，p-ERK,p-PKC及p-Akt皆有一定抑制作用(其中對p38和JNK磷酸化水平有顯著的抑制效應)，而對p-PI3K，其作用不甚明顯：同時，TAL對模型組TLR4受體水平的增高也無明顯