血水草白屈菜紅堿滅螺效果及對(duì)釘螺肝臟損傷機(jī)理的研究.pdf

1、從血水草根及根莖中提取的血水草總生物堿(Eomecon chionantha alkaloids，ECA)被課題組證實(shí)具有良好的殺螺作用，白屈菜紅堿(chelerythrine，CHE)是ECA的主要成分之一。從ECA中分離單體白屈菜紅堿進(jìn)行殺螺作用及其殺螺機(jī)制研究，為血水草作為植物殺螺劑開(kāi)發(fā)利用提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 從血水草粉末中分離CHE。參考WHO規(guī)定的“殺螺劑實(shí)驗(yàn)室終篩方法”的浸泡法進(jìn)行殺螺試驗(yàn)。于20℃、25℃、3

2、0℃溫度下，觀(guān)察釘螺在25mg/L、12.5mg/L、6.25mg/L、3.125mg/L、1.5625mg/L、0.7813mg/L、0.3906mg/L、0.1953mg/L濃度的CHE溶液中浸泡24、48、72、96h死亡率。設(shè)去氯水對(duì)照組。通過(guò)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行逐步回歸計(jì)算建立回歸數(shù)學(xué)模型和因素分類(lèi)區(qū)域處理，探討溫度、時(shí)間、藥物濃度等各種因素對(duì)殺螺效果的影響及變化規(guī)律。
　　 以釘螺肝臟為樣本，探討CHE殺螺機(jī)理。設(shè)置CHE20

3、mg/L10mg/L、5mg/L水溶液和清水組25℃浸泡釘螺36h，解剖活螺，分離肝臟，提取肝細(xì)胞DNA，進(jìn)行DNA瓊脂糖凝膠電泳；將肝組織搗碎，制備肝細(xì)胞懸液，用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CHE溶液是否誘導(dǎo)釘螺肝細(xì)胞凋亡。
　　 配制5mg/L CHE的水溶液，浸泡釘螺36 h，解剖活螺取肝臟，提取CHE處理組和清水對(duì)照組釘螺肝臟蛋白質(zhì)，雙向凝膠電泳，ImageMaster2D5.0軟件分析圖譜，篩選差異蛋白質(zhì)，并用質(zhì)譜鑒定。分析CHE致

4、釘螺肝臟蛋白質(zhì)表達(dá)的變化。
　　 CHE殺螺研究及對(duì)釘螺肝臟損傷機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)：
　　 (1)CHE具有良好的殺螺作用。溫度20℃、96h、CHE濃度25mg/L釘螺死亡率可達(dá)90％；25℃、CHE濃度0.7813mg/L以上、浸泡96h釘螺死亡全部死亡；溫度30℃、CHE濃度0.1953mg/L以上、浸泡72h以上釘螺死亡率均達(dá)100％；濃度0.1953mg/L以上浸泡96h，20℃、25℃、30℃溫度殺螺效果與對(duì)照組差

5、異均具有顯著性(P<0.05)。
　　 (2)CHE不同濃度、浸泡時(shí)間、溫度殺滅釘螺的效果不同。用SPSS17.0軟件經(jīng)多元線(xiàn)性逐步回歸方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，濃度、作用時(shí)間及溫度均為CHE滅螺效果的影響因素。隨著藥物濃度增高，溫度升高，浸泡時(shí)間延長(zhǎng)，CHE殺滅釘螺的效果增加。各因素間差異有顯著性(P<0.05)。
　　 (3)釘螺肝細(xì)胞DNA瓊脂糖凝膠電泳圖譜結(jié)果顯示20mg/L、10mg/L、5mg/L CHE溶液處

6、理后均未見(jiàn)典型DNA Ladder；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)20mg/L、10mg/L、5mg/L CHE溶液處理組和清水對(duì)照組的釘螺肝細(xì)胞早期凋亡率分別為5.59％、3.42％、5.71％、3.85％，晚期凋亡細(xì)胞率分別為1.59％、1.31％、2.7％、0.7％，總凋亡率分別為7.18％、4.73％、8.41％和4.55％；各CHE溶液處理組和清水對(duì)照組兩組結(jié)果比較近，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，提示上述各濃度CHE溶液浸泡后與清水對(duì)照

7、釘螺肝細(xì)胞的凋亡無(wú)差別。
　　 (4)CHE處理組和清水對(duì)照組分別平均檢測(cè)到(405±11)個(gè)和(385±8)個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)，成功鑒定了其中4個(gè)蛋白點(diǎn)，分別是肌動(dòng)蛋白、甘氨酸烯醇樣蛋白、β肌動(dòng)蛋白。這些蛋白在CHE處理后表達(dá)均下調(diào)。
　　 從以上研究結(jié)果得出如下結(jié)論：
　　 (1)CHE具有殺滅釘螺的作用。
　　 (2)CHE溶液殺滅釘螺效果受濃度、溫度和作用時(shí)間影響，CHE濃度增加、環(huán)境溫度升高及延長(zhǎng)浸泡時(shí)