TREM-1的表達(dá)對(duì)大鼠腸巨噬細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的:
　　通過(guò)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究髓系細(xì)胞觸發(fā)受體-1(Triggering receptor expressed onmyeloid cells-1，TREM-1)的表達(dá)對(duì)大鼠腸巨噬細(xì)胞凋亡的影響，并通過(guò)LP17可抑制TREM-1信號(hào)通路的激活，探討炎癥環(huán)境下腸黏膜屏障損傷治療的新靶點(diǎn)。
　　方法:
　　(1)體外分離腸巨噬細(xì)胞，臺(tái)盼藍(lán)染色并計(jì)數(shù)，待巨噬細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好后免疫熒光鑒定并拍照。
　　(2)將大鼠腸巨

2、噬細(xì)胞分組培養(yǎng)并以不同藥物處理:①空白對(duì)照組(Control組):加入200ul含10％胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基;②a實(shí)驗(yàn)組（LPS組）:培養(yǎng)液中加入LPS，濃度為1 mg/L;③b實(shí)驗(yàn)組（LPS+LP17組）:用LP17及LPS聯(lián)合處理正常狀態(tài)下的大鼠腸巨噬細(xì)胞，加藥濃度為L(zhǎng)PS:1 mg/L，LP17:0.1 mg/L。
　　(3)上述藥物處理后的腸巨噬細(xì)胞培養(yǎng)6小時(shí)，通過(guò)熒光定量-多聚酶鏈反應(yīng)(Fluorescen

3、ce quantitative-polymerase chain reaction，F(xiàn)Q-PCR)檢測(cè)各組腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor-α，TNF-α)的基因表達(dá)水平，TUNEL一步法檢測(cè)大鼠腸巨噬細(xì)胞凋亡情況，熒光顯微鏡下觀察并記錄。按上述分組腸巨噬細(xì)胞收集處理，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡，分析記錄熒光強(qiáng)度。
　　結(jié)果:
　　(1)大鼠腸巨噬細(xì)胞體外分離后分布均勻，生長(zhǎng)狀態(tài)良好，細(xì)胞活力可，符合

4、實(shí)驗(yàn)要求。
　　(2)經(jīng)藥物處理后后LPS組TNF-α的基因表達(dá)水平高于LPS+LP17組和對(duì)照組(均P＜0.05); LPS+LP17組與對(duì)照組對(duì)比無(wú)差異。
　　(3)應(yīng)用PI染色法檢測(cè)腸巨噬細(xì)胞凋亡情況，顯示LPS組凋亡巨噬細(xì)胞較空白對(duì)照組明顯增多，LPS+LP17腸巨噬細(xì)胞的凋亡細(xì)胞比LPS組稍減少。
　　(4)流式細(xì)胞儀檢測(cè)分析腸巨噬細(xì)胞凋亡情況，對(duì)照組(C)，實(shí)驗(yàn)組(LPS和LPS+LP17)中腸巨噬細(xì)胞的凋

5、亡率分別為:6.76％，15.22％和10.52％。LPS組與空白對(duì)照組相比差異有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，LPS組與LPS+LP17組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　脂多糖(LPS)可以刺激腸巨噬細(xì)胞TREM-1的表達(dá)，模擬炎癥環(huán)境下腸道生理狀態(tài)，促進(jìn)腸巨噬細(xì)胞的凋亡，TREM-1特異性阻斷劑LP17能有效抑制TREM-1的表達(dá)，減少腸巨噬細(xì)胞的凋亡，減輕腸黏膜的損傷，有望成為治療腸屏障功能障礙的