BMPR-IB基因作為貴州白山羊多胎性候選基因的研究.pdf

1、綿羊的多胎性狀是養(yǎng)羊業(yè)獲得更多經(jīng)濟(jì)效益的重要途徑。近年來在澳大利亞Booroola羊發(fā)現(xiàn)其存在多胎基因(FceB)，并對(duì)其遺傳特點(diǎn)、遺傳效應(yīng)等進(jìn)行了廣泛研究。隨后的幾年內(nèi)，以其為候選基因在不同國家的綿羊品種中進(jìn)行了更為廣泛的發(fā)掘，我國在湖羊和小尾寒羊兩個(gè)品種中都檢測(cè)到了該基因，但是多胎基因在我國山羊中一直沒有明確的報(bào)道。 本研究采用貴州白山羊主要產(chǎn)區(qū)隨機(jī)抽樣法，在貴州省德江、惠水、睛隆、天柱和畢節(jié)等縣的山羊養(yǎng)殖基地抽取了227只

2、不同產(chǎn)羔率的貴州白山羊。在實(shí)驗(yàn)室采用PCR-RFLP、PCR-SSCP和Tetra-ARMSPCR方法分析了貴州白山羊多胎性候選基因BMPR-IB基因第5外顯子至第10外顯子在貴州白山羊中的多態(tài)性，并從分子水平探索貴州白山羊多胎性狀的分子遺傳機(jī)理。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 1.在BMPR-IB基因第5外顯子至第10外顯子分別設(shè)計(jì)6對(duì)特異性引物，擴(kuò)增出目的片段后進(jìn)行PCR-SSCP分析，建立了最佳PCR-SSCP條件，對(duì)227只貴州白山羊進(jìn)

3、行了檢測(cè)，結(jié)果只存在.AA型個(gè)體。 2.對(duì)BMPR-IB基因外顯子6的擴(kuò)增片段進(jìn)行了RFLP分析。為便于檢測(cè)大量樣品，在引物R6中引入了一個(gè)點(diǎn)突變，使突變基因型的PCR產(chǎn)物產(chǎn)生一個(gè)AvaII酶切位點(diǎn)，而非突變型樣品中不含有該位點(diǎn)不能被切割。對(duì)227份貴州白山羊血液樣品進(jìn)行RFLP分析，均為1條140bp帶，沒有發(fā)現(xiàn)外顯子6有單堿基突變，與其SSCP的檢測(cè)結(jié)果一致。根據(jù)四引物ARMS-PCR的原理，設(shè)計(jì)兩對(duì)特異性引物對(duì)BMPR-I

4、B基因第6外顯子進(jìn)行擴(kuò)增。對(duì)所采集到的227份貴州白山羊樣品DNA進(jìn)行檢測(cè)，沒有發(fā)現(xiàn)外顯子6編碼區(qū)746位有單核苷酸多態(tài)性，與其SSCP的檢測(cè)結(jié)果一致。 對(duì)貴州白山羊BMPR-IB基因的分析表明，BMPR-IB基因外顯子5至外顯子10中沒有發(fā)現(xiàn)堿基突變，說明從綿羊、人的BMPR-IB基因中重要結(jié)構(gòu)域GS和絲氨酸/蘇氨酸激酶結(jié)構(gòu)域發(fā)現(xiàn)的堿基突變?cè)谫F州白山羊中的自然發(fā)生率低，該基因在貴州白山羊群體中很保守，提示BMPR-IB蛋白的高