黃芪扶正湯對免疫功能的影響及其機制的初步研究.pdf

1、第一章：不同劑量黃芪扶正湯對免疫抑制小鼠的溶血素和IL-2的影響 目的：觀察不同劑量的黃芪扶正湯對免疫抑制小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用，尋找最佳的干預(yù)劑量。 方法：取昆明種小鼠60只，隨機分為6組，A組為空白對照組、B組為模型對照組、C組為9g生藥/kg組、D組為18g生藥/kg組、E組為36g生藥/kg組、F組為72g生藥/kg組，每組10只小鼠。除空白對照組外，其余小鼠在給藥后第8、10、12天，腹腔注射氫化可的松25mg/k

2、g/d，造出免疫抑制的動物模型?？瞻讓φ战M和模型對照組予以生理鹽水灌胃，其余組用不同劑量的黃芪扶正湯水煮液進行灌胃14天，檢測小鼠血清溶血素的生成和IL-2的含量。 結(jié)果：使用氫化可的松后，小鼠血清溶血素和IL-2的水平明顯下降，與空白組比有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。藥物組經(jīng)黃芪扶正湯干預(yù)后，小鼠血清溶血素和IL-2水平在18g生藥/kg的劑量開始升高，在36g生藥/kg劑量時作用最強，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

3、 結(jié)論：1、使用氫化可的松造模成功。2、黃芪扶正湯的最佳干預(yù)劑量為36g生藥/kg。 第二章：黃芪扶正湯對免疫抑制小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用 目的：從不同方面觀察黃芪扶正湯對免疫抑制小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用。 方法：取昆明種小鼠40只，隨機分為4組，分別為空白組、模型組、黃芪扶正湯組和與玉屏風(fēng)散組。除空白對照組外，其余小鼠在給藥后第8、10、12天，腹腔注射氫化可的松25mg/kg/d，造出免疫抑制模型，空白對照組腹腔注射等

4、量生理鹽水。藥物組小鼠灌胃給藥14天，空白及模型對照組予等量生理鹽水灌胃14天。給藥后第15天，取小鼠血液和脾臟進行相關(guān)指標檢測。采用TUNEL法檢測小鼠脾細胞凋亡；免疫組化檢測小鼠脾臟免疫細胞Bcl-2與Bax蛋白的表達；測定小鼠血清溶血素生成；ELISA法測血清中INF-γ、IL-4水平；流式細胞術(shù)測小鼠外周血T細胞亞群；RT-PCR和RealtimePCR方法測小鼠脾細胞INF-γ、IL-4、T-bet和GATA-3mRNA表達。

5、 結(jié)果：1、模型組與空白組相比，脾細胞凋亡增多（P<0.05），使用黃芪扶正湯和玉屏風(fēng)散后凋亡減少，與模型組比有統(tǒng)計學(xué)意義，但組間也無差異。2、模型組與空白組相比，脾臟Bcl-2陽性細胞減少Bax陽性細胞增多（P<0.05），經(jīng)黃芪扶正湯和玉屏風(fēng)散干預(yù)后，Bcl-2增加Bax減少（P<0.05），但組間也無差異。3、模型組的血清溶血素低于空白組（P<0.05），經(jīng)黃芪扶正湯和玉屏風(fēng)散干預(yù)后，溶血素較模型組明顯升高（P<0.05）

6、，但兩組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。4、模型組與空白組相比，血清INF-γ下降、IL-4升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，經(jīng)黃芪扶正湯和玉屏風(fēng)散干預(yù)后，INF-γ明顯升高、IL-4下降（P<0.05），且黃芪扶正湯比玉屏風(fēng)散的效果更明顯（P<0.05）。5、模型組的CD3+、CD4+、CD8+T細胞及CD4+/CD8+均明顯低于空白組（P<0.05），使用黃芪扶正湯或玉屏風(fēng)散后上述指標均升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，而黃芪扶正湯組比玉屏風(fēng)散組升高更明顯（P<0

7、.05）。6、RT-PCR和實時熒光定量PCR結(jié)果均顯示，模型組與空白組對比，細胞因子INF-γmRNA表達下降、IL-4mRNA表達增加，同時轉(zhuǎn)錄因子T-betmRNA表達下降而GATA-3mRNA表達升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。黃芪扶正湯和玉屏風(fēng)散均能升高INF-γ和T-bet的mRNA表達，降低IL-4和GATA-3的mRNA表達，使T-bet/GATA-3比值更接近正常，且黃芪扶正湯效果更顯著，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。。 結(jié)論：1

8、、黃芪扶正湯能提高免疫抑制小鼠的體液免疫功能，但與玉屏風(fēng)散比無統(tǒng)計學(xué)差異。2、黃芪扶正湯能提高免疫抑制小鼠的細胞免疫功能，平衡Th1/Th2細胞因子的比例，效果優(yōu)于玉屏風(fēng)散。3、黃芪扶正湯調(diào)節(jié)Th1/Th2細胞因子比例的作用，可能部分源于對轉(zhuǎn)錄因子T-bet和GATA-3的mRNA表達的影響。 第三章黃芪扶正湯對老年人免疫功能的影響 目的：探討黃芪扶正湯能否提高老年人的免疫和抗氧化功能。 資料與方法：選擇無嚴重疾

9、病、能生活自理的老年人（年齡>60歲）60例，男女各半。隨機分為中藥組和西藥組，中藥組服用黃芪扶正湯劑300ml每天分兩次服用。西藥組肌注卡介菌多糖核酸注射液（PolysaccharidenucleicacidfractionofBCG，BCG-PSN），商品名斯奇康針1mg/次，每周2次。兩組均用藥4周。干預(yù)前后分別抽取兩組觀察對象的靜脈血標本，檢測相關(guān)免疫學(xué)指標。檢測方法為：使用ELISA法測血清中IgG、INF-γ和IL-4濃度，

10、流式細胞術(shù)測人外周血T細胞亞群和NK細胞數(shù)量，黃嘌呤氧化酶法測人血清超氧化物歧化酶（SOD），比色法測人血清總抗氧化能力硫代巴比妥酸比色法測人血清微量丙二醛（MDA）。 結(jié)果：1、斯奇康組研究對象失訪率高于黃芪扶正湯組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2、干預(yù)后，黃芪扶正湯組老年人血清IgG水平提高，與治療前相比有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。但與斯奇康組對比無統(tǒng)計學(xué)差異。3、干預(yù)后，黃芪扶正湯組老年人血清INF-γ升高，IL-4下降，與治療前

11、相比均有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。但與斯奇康組對比無統(tǒng)計學(xué)差異。4、干預(yù)后，黃芪扶正湯組老年人全血CD4+/CD8+T細胞升高，與治療前相比有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。而且治療前后的差值高于斯奇康組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。5、干預(yù)后，黃芪扶正湯組全血CD56+細胞數(shù)量升高，與治療前相比有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。但與斯奇康組相比無差異。6、干預(yù)后，黃芪扶正湯組研究對象的血清SOD和總抗氧化能力水平較治療前提高，差異有統(tǒng)

12、計學(xué)意義（P<0.05）。而陽性對照組（斯奇康組）與治療前相比無明顯改變（P>0.05）。兩組間治療前后差值比較，黃芪扶正湯組顯著高于斯奇康組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。7、干預(yù)后，黃芪扶正湯組研究對象的血清MDA水平較治療降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。而陽性對照組（斯奇康組）與治療前相比血清MDA水平無明顯改變（P>0.05）。兩組間治療前后差值比較，黃芪扶正湯組顯著高于斯奇康組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。