不同溫度處理對溫敏核不育水稻廣占63S育性表達及其蛋白質組的影響.pdf

1、本實驗以溫敏核不育水稻廣占63s為實驗材料，研究了在水稻育性敏感期對其進行低溫(22℃)處理后水稻育性的變化，并與高溫(>26℃)對照下的水稻育性進行對比，將育性差異較大的一組水稻幼穗蛋白采用雙向電泳技術進行分離，找出差異蛋白，并將這些差異蛋白進行MALDI-TOF-MS鑒定和功能預測。主要結果如下： 1、與高溫對照組相比，在水稻育性轉換敏感期(即雌雄蕊形成期至花粉母細胞形成期)進行低溫處理，其水稻育性顯著提高。高溫處理組(即大

2、于26℃高溫處理)水稻的育性僅為1％，而同時低溫處理(22℃)的水稻育性高達25.7％。 2、建立和優(yōu)化了一套適合實驗室條件下幼穗全蛋白分離、鑒定的雙向電泳方法。采用IPG膠條進行第一向電泳，上樣量為200μg，水化時間為12hr，然后500V電泳1hr，再1hr梯度上升到1000V，后3hr梯度上升到8000V，8000V穩(wěn)定2.5hr即20000Vhr，共約34700Vhr。第二向電泳為連續(xù)的SDS—PAGE，凝膠濃度為12

3、.5％。通過銀染顯色，獲得了分辨率和重復性較好的雙向電泳圖譜。 3、本研究對育性差異較大的兩組水稻幼穗蛋白采用雙向電泳技術進行分離，結合PDQuest7.4 2D膠分析，在24×18 cm大小的膠上可檢測到約800個蛋白質點。高溫處理膠和低溫處理膠相比，檢測到差異表達的蛋白質點數共為147個，將差異點蛋白經過酶解和基質輔助激光解析電離飛行時間質譜(matrix assisted laserdesormion/ionization

4、 time of flight mass spectrometry，MALDI-TOF-MS)進行了肽質指紋圖分析，通過采用Mascot軟件對MSDB數據庫進行查詢和分析，其中14個蛋白質點得到了鑒定。鑒定的差異蛋白質中，第Ⅴ期可育水稻中表達量上調的蛋白有：烯醇酶(2-磷酸甘油酸鹽(或酯)脫水酶)，磷酸丙糖異構酶，線粒體F1-ATP酶；第Ⅴ期可育水稻特異表達的蛋白為小麥中組蛋白H<,2>B同源蛋白。第Ⅵ期可育水稻中表達量上調的蛋白有：咖