大瀧六線魚繁殖內(nèi)分泌生理功能及GH基因部分序列的克隆.pdf

1、大瀧六線魚屬于納形目魚類，在我國主要產(chǎn)自黃海和渤海沿岸。本論文以青島近海水域性成熟的野生大瀧六線魚(Hexagrammos otakii Jordan and Starks)為研究對(duì)象，運(yùn)用組織學(xué)、免疫組織化學(xué)和性激素放射免疫測定方法，對(duì)大瀧六線魚的性腺和血漿性類固醇激素進(jìn)行了深入的研究和分析，并采用分子生物學(xué)的方法對(duì)大瀧六線魚生長激素(GH)的部分序列進(jìn)行了克隆研究。所得結(jié)果與結(jié)論如下： 1.大瀧六線魚性腺發(fā)育的組織學(xué)觀察

2、 大瀧六線魚精巢一對(duì)，非繁殖期的精巢為線條狀或扁帶形，淡黃色，繁殖期精巢則肥大呈睪丸狀，白色至乳白色。組織學(xué)觀察大瀧六線魚精巢為典型的小葉型結(jié)構(gòu)，精小葉間有間質(zhì)細(xì)胞(Leydigs cell)，小葉內(nèi)有支持細(xì)胞(Sertolis cell)及精小囊結(jié)構(gòu)，其精巢的周年發(fā)育歷程可分為：重復(fù)發(fā)育Ⅲ期，精子形成Ⅳ期，精子成熟Ⅴ期和退化吸收Ⅵ期。8月下旬生精活動(dòng)啟動(dòng)，生殖季節(jié)為11月至翌年1月份，2～4月份為退化吸收期，5～7月份為重復(fù)發(fā)育Ⅲ

3、期。 大瀧六線魚卵巢和精巢一樣，成對(duì)，非繁殖期的卵巢淡黃色或淡紅色，繁殖期卵巢則飽滿呈長囊狀，青灰色。組織學(xué)觀察，卵巢的周年發(fā)育分為5個(gè)時(shí)期：重復(fù)發(fā)育Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期、Ⅴ期和退化吸收Ⅵ期。卵細(xì)胞發(fā)育分為5個(gè)時(shí)相，Ⅱ時(shí)相卵母細(xì)胞胞質(zhì)被蘇木精染成深藍(lán)色，Ⅲ時(shí)相卵母細(xì)胞卵黃開始積累；Ⅳ時(shí)相卵母細(xì)胞放射膜明顯；Ⅳ時(shí)相后期核開始偏位，胚基出現(xiàn)；Ⅴ時(shí)相成熟卵細(xì)胞胞核消失，呈游離狀態(tài)；Ⅵ期卵巢內(nèi)卵黃顆粒融合成塊狀，并開始退化吸收。各個(gè)時(shí)期的卵

4、細(xì)胞核仁數(shù)量，胞膜厚度及細(xì)胞體積變化很大。 2.大瀧六線魚血漿性激素T和E2的季節(jié)變化研究 按季節(jié)分四次采集野生大瀧六線魚血液，采用Ⅰ<'125>標(biāo)記的放射免疫測定方法檢測雄魚和雌魚的睪酮(T)和雌二醇(E2)的水平。研究發(fā)現(xiàn)大瀧六線魚血漿性激素在年周期中的變化規(guī)律為：在繁殖期，即從11月份到來年的1月份，大瀧六線魚體內(nèi)的雌二醇及睪酮含量增長迅速，呈顯著性變化(P<0.05)：雄魚血漿睪酮含量均值為21.2625ng/d

5、l，血漿雌二醇E<,2>含量均值為16.5908pg/ml；雌魚血漿雌二醇E<,2>含量均值為13.36083pg/ml，血漿睪酮含量均值為39.381ng/d1，均達(dá)到最高峰值。在非繁殖期即2～8月份血漿性激素水平下降迅速，呈顯著性變化(P<0.05)，其中雌性大瀧六線魚血漿中T含量在5～7月份已經(jīng)檢測不到。在繁殖前期即8～10月份性激素含量均開始緩慢增高。 3.大瀧六線魚性腺免疫組織化學(xué)觀察 在卵巢發(fā)育的早期卵母細(xì)胞

6、的胞質(zhì)對(duì)雌激素受體(ER)、雄激素受體(AR)抗體顯示強(qiáng)的免疫陽性反應(yīng)，在Ⅲ時(shí)相卵母細(xì)胞胞質(zhì)對(duì)ER、AR抗體的免疫陽性明顯減弱，在Ⅳ時(shí)相卵母細(xì)胞中胞質(zhì)對(duì)ER、AR抗體呈現(xiàn)免疫陰性反應(yīng)，核質(zhì)對(duì)ER抗體呈現(xiàn)弱的免疫陽性反應(yīng)、濾泡細(xì)胞對(duì)ER、AR抗體均呈現(xiàn)弱的陽性反應(yīng)。在早期卵母細(xì)胞胞質(zhì)、核質(zhì)、核仁對(duì)芳香化酶抗體均成強(qiáng)陽性反應(yīng)，進(jìn)入大生長期免疫陽性明顯減弱，在Ⅳ時(shí)相卵母細(xì)胞中，僅核質(zhì)和濾泡膜呈弱的免疫陽性反應(yīng)。 在雄性，在精巢發(fā)育的各

7、個(gè)時(shí)期，ER抗體主要定位在精巢的間質(zhì)細(xì)胞和精小囊壁，呈強(qiáng)的免疫陽性反應(yīng)。AR抗體僅定位在精巢的間質(zhì)細(xì)胞處，但免疫陽性反應(yīng)比ER抗體要弱。芳香化酶抗體在重復(fù)發(fā)育Ⅲ期中呈強(qiáng)的免疫陽性反應(yīng)，尤其是精原細(xì)胞、初級(jí)精母細(xì)胞的細(xì)胞核。隨著精巢的發(fā)育，免疫陽性反應(yīng)逐漸減弱，次級(jí)精母細(xì)胞僅胞核呈弱的陽性反應(yīng)，其余精子細(xì)胞、精子均成陰性反應(yīng)。這些研究結(jié)果為證明性類固醇激素和芳香化酶參與調(diào)節(jié)性腺發(fā)育成熟和生殖內(nèi)分泌調(diào)控軸的功能提供了新的形態(tài)學(xué)依據(jù)。