繼代次數(shù)對(duì)草地早熟禾愈傷組織內(nèi)源激素水平和DNA變異的影響.pdf

1、為了探索繼代次數(shù)對(duì)草地早熟禾愈傷組織內(nèi)源激素水平和。DNA變異的影響以及愈傷組織分化能力與內(nèi)源激素水平之間的關(guān)系。本研究以草地早熟禾品種‘納蘇’為材料，取地下根莖上的芽(莖芽)為外植體，通過(guò)在 N<,6>基本培養(yǎng)基中附加不同濃度的2,4-D、6-BA和NAA研究了草地早熟禾莖芽愈傷組織再生體系的建立。在此基礎(chǔ)上，利用酶聯(lián)免疫吸附法研究了不同繼代次數(shù)愈傷組織的內(nèi)源激素水平，利用AFLP分子標(biāo)記技術(shù)分析了繼代次數(shù)對(duì)愈傷組織DNA變異的影響。

2、主要結(jié)果如下： 以N<,6>為基本培養(yǎng)基，愈傷組織誘導(dǎo)的適宜植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑水平是2,4-D2.0mg/L+6-BA0.2mg/L；愈傷組織繼代培養(yǎng)的適宜植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑水平是2,4-D1.0mg/L+6-BA0.5mg/L；愈傷組織分化的適宜植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑水平是 6-BA1.0mg/L+KT0.5mg/L；不定芽長(zhǎng)到1-2cm時(shí)轉(zhuǎn)接到無(wú)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的MS培養(yǎng)基中進(jìn)行生根和壯苗培養(yǎng)，30d左右即可長(zhǎng)成根系發(fā)達(dá)的健壯植株，移栽成活率達(dá)到

3、100％。同時(shí)發(fā)現(xiàn)繼代次數(shù)對(duì)愈傷組織的分化率有明顯影響，繼代2次后開始分化，隨著繼代次數(shù)的增加，其分化率逐漸升高，繼代5到6次的愈傷組織分化率最高，之后隨著繼代次數(shù)的增加，分化率逐漸降低。 草地早熟禾愈傷組織中IAA和ABA含量在其繼代1到4次時(shí)，其含量逐漸升高，繼代5次達(dá)最大值，之后，又逐漸降低，繼代后愈傷組織分化率也呈先升高再降低的變化趨勢(shì)，繼代5次的愈傷組織分化率最高，表明內(nèi)源IAA和ABA含量上升到或維持在較高水平對(duì)愈傷

4、組織的分化有促進(jìn)作用；GA含量的在繼代1次時(shí)較高，之后逐漸降低，繼代4到6次時(shí)始終保持在較低水平，之后又逐漸升高，表明內(nèi)源GA的含量對(duì)愈傷組織的分化可能有阻礙作用；ZR的含量隨著繼代次數(shù)的增加而增加，與愈傷組織分化沒有明顯的相關(guān)性。 繼代3次的愈傷組織在AFLP電泳圖譜上反映出高頻率的譜帶缺失，與繼代1次相比，缺失了550條帶，增加了73條帶；繼代5、7、9、11次的愈傷組織，檢出片段的多態(tài)性比率分別為40.57％、49.73％

5、、50.88％、53.74％，與繼代1次相比，其增加和缺失的多態(tài)性片段總和分別為501條、500條、521條、699條，表明隨著繼代次數(shù)的增加，愈傷組織的變異逐漸增多，繼代3次是草地早熟禾愈傷組織變異的高發(fā)期；通過(guò)比較不同繼代次數(shù)間愈傷組織DNA水平的變異，發(fā)現(xiàn)繼代3次與繼代1次相比，有623條多態(tài)性帶， 7次與5次相比，9次與7次相比、11次與9次相比，其多態(tài)性帶分別為617條、597條、523條、494條，表明隨著繼代次數(shù)的增加，變

6、異逐漸趨于平緩。由此可以推測(cè)出，在草地早熟禾組織培養(yǎng)過(guò)程中，如果進(jìn)行種子資源保存或遺傳轉(zhuǎn)化，可將愈傷組織的繼代次數(shù)控制在5到9次，以減少愈傷組織階段的變異，進(jìn)而獲得遺傳穩(wěn)定性高的再生植株；如果要更好的利用組織培養(yǎng)過(guò)程中產(chǎn)生的體細(xì)胞變異進(jìn)行新品種的培育，可將愈傷組織繼代次數(shù)控制在3到5次或9次以上，以利用愈傷組織階段的變異，進(jìn)而獲得遺傳變異范圍廣的再生植株；在草地早熟禾體細(xì)胞誘變育種的研究中，考慮到愈傷組織的變異率和分化率之間的平衡，可將