丹參初級三體的鑒定及其分子基礎(chǔ)研究.pdf

1、丹參（Salvia miltiorrhiza Bunge），又名赤參，為唇形科(Labiatae)鼠尾草屬（Salvia）多年生草本植物，其干燥的根及根莖可入藥。作為我國常用的傳統(tǒng)中藥，丹參具有生育期短、易栽培、易繁殖、適應(yīng)性強、基因組小、染色體數(shù)目少(2n=16)等特性，便于進行分子和遺傳學(xué)等生物學(xué)分析。丹參作為中藥研究的模式生物，與其相關(guān)的包括基因組測序、功能基因研究、藥用成分分析、藥效藥理分析等研究得到廣泛開展。本研究從形態(tài)學(xué)、細

2、胞學(xué)角度，首次鑒定獲得丹參的一種初級三體，并結(jié)合AFLP、RAPD分子標記方法，分析其DNA水平上的變化，進而為后續(xù)丹參整套初級三體的鑒定獲得、丹參基因組計劃的基因定位等研究奠定基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下:
　　 1.從形態(tài)學(xué)、細胞學(xué)角度鑒定獲得丹參的一種初級三體，該三體細胞中含有17條染色體，較普通二倍體丹參(2n=16)增加了一條額外染色體，即其染色體組成為2n+l，經(jīng)核型分析初步確定額外染色體為8號染色體。
　　 2.對比

3、觀察初級三體與二倍體丹參的性狀，兩者在葉形、株高等方面無明顯差異，但花、根部形態(tài)特征表現(xiàn)顯著差異，具體表現(xiàn)為:二倍體丹參花色為紫色，花冠呈明顯二唇形，有兩個可育雄蕊，而初級三體植株無花冠，且不具有可育雄蕊，表現(xiàn)為雄性不育;二倍體丹參的根部較小，分支較多，初級三體丹參的根部明顯粗大，且分支少。
　　 3.以初級三體丹參、二倍體丹參、三倍體丹參為材料進行遺傳相似性分析，AFLP分析結(jié)果顯示，從45對AFLP引物組合中篩選獲得26對引

4、物組合的擴增結(jié)果條帶清晰，且差異條帶穩(wěn)定，共得到718個擴增位點，其中呈現(xiàn)多態(tài)性的位點共有278個，多態(tài)位點比率(PPB)分布在18.18％～66.67％范圍內(nèi)，平均為38.70％。利用NTSYS軟件進行的聚類分析和遺傳相似性系數(shù)分析結(jié)果顯示，初級三體丹參與三倍體丹參間的遺傳相似性系數(shù)為0.7938，而其與二倍體丹參間的遺傳相似系數(shù)為0.7256，后者相對較小，即初級三體丹參與三倍體丹參的基因組組成相對接近。對17個擴增差異條帶回收及克

5、隆測序，測序結(jié)果在NCBI數(shù)據(jù)庫中進行Blastx分析，共有12個差異片段的序列檢索到同源性序列，涉及醇腈酶、逆轉(zhuǎn)座子蛋白、未命名蛋白或假定蛋白等，另外5個差異片段未能檢索到同源序列。
　　 4.以初級三體丹參及二倍體丹參為材料進行RAPD分析，結(jié)果顯示，從113個隨機引物中篩選出34個隨機引物，其擴增結(jié)果有差異明顯條帶，且在重復(fù)實驗中較穩(wěn)定。共得到232個擴增位點，其中130個位點呈現(xiàn)多態(tài)性，對其中5條差異條帶回收并克隆測序，