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文檔簡介
1、土壤作為生態(tài)系統(tǒng)的重要組成部分之一,是珍貴的自然資源。而土壤微生物作為土壤中的活性組分,在維持土壤生態(tài)平衡如養(yǎng)分運轉(zhuǎn)、有機質(zhì)分解和環(huán)境污染物凈化中發(fā)揮著重要作用。土壤微生物群落結(jié)構(gòu)組成及活性變化又是衡量土壤質(zhì)量、維持土壤肥力和作物生產(chǎn)力的一個重要指標(biāo)。
本課題首先運用PCR為基礎(chǔ)的rRNA文庫的方法,以高次團粒土壤微生物宏基因組為模板,成功克隆測序了其原核16S rRNA基因及真核ITS序列,初步解析了冠中土壤微生物群落的組成
2、結(jié)構(gòu)。其次是針對所獲得的16S序列使用基于單堿基差異識別的特異引物設(shè)計技術(shù),即在設(shè)計過程中人為引入錯配堿基,增加引物特異性,由此設(shè)計出5個門的特異性引物。最后,經(jīng)過篩選和PCR條件優(yōu)化,將設(shè)計的引物用于不同比例混合質(zhì)粒模板和新的土壤微生物宏基因組的實時熒光定量PCR,從而達(dá)到對幾個門的微生物進行快速定量識別的目的。
基于單堿基差異識別的特異性引物技術(shù)設(shè)計門特異性引物,打破了傳統(tǒng)方法設(shè)計引物的局限,更有助于提高引物對目標(biāo)序列識別
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