金水寶膠囊影響實驗性慢性支氣管炎ET-1和NO的機制研究.pdf

1、目的：金水寶膠囊(每粒含蟲草菌粉0.33g)系冬蟲夏草分離所得蟲草菌的發(fā)酵制品。冬蟲夏草甘溫，入肺、腎經(jīng)，具有補腎保肺、秘精益氣之功效，對慢性支氣管炎(chronicbronchitis，CB)具有較好的治療效果，但其治療作用機制尚未完全明確。本研究采用氣管內(nèi)滴注脂多糖(LPS)的方法復(fù)制CB大鼠模型，然后給予藥物干預(yù)，檢測大鼠血漿(清)、肺組織中ET-1、NO的含量，運用HE染色和SP免疫組織化學(xué)染色等技術(shù)手段，觀察CB狀態(tài)下支氣管、

2、肺組織病理形態(tài)學(xué)特征及金水寶膠囊對肺組織中cNOS表達的影響，初步探討其作用機理。 方法：SD大鼠50只，按體重隨機分為CB模型組(簡稱“模型組”，model group)、金水寶低劑量組(簡稱“金低組”，low-dose group)、金水寶高劑量組(簡稱“金高組”，high-dose group)和桂龍咳喘寧對照組(簡稱“桂龍組”，guilonggroup，陽性對照用藥)，并設(shè)不加處理的正常對照組(簡稱“正常組”，norma

3、l group)。每組10只，雌雄各半。 造模各組大鼠用1％的戊巴比妥鈉(50mg/kg)腹腔注射，麻醉成功后，使其仰臥固定于操作臺，暴露聲門，以靜脈套管針代替氣管導(dǎo)管，拔除針芯，快速插入氣管，將LPS 200μg注入氣管內(nèi)；正常組大鼠氣管內(nèi)滴入無菌生理鹽水0.5ml/只。喂養(yǎng)3周。 造模成功后，正常組和模型組灌服生理鹽水，10ml/kg；金低組和金高組每日用藥劑量分別為0.3g/kg(相當(dāng)于臨床成人用藥量的7倍)、

4、0.6g/kg(相當(dāng)于臨床成人用藥量的14倍)，以0.03g/ml和/或0.06g/ml的混懸液灌胃；桂龍組每日用藥劑量0.9g/kg(相當(dāng)于臨床成人用藥量的14倍)，以0.09g/ml的混懸液灌胃。以上均為每日1次，連續(xù)3周。 檢測樣本制備：灌藥3周結(jié)束后第2天，斷頭取血，立即以3500r/min離心5min，分離血漿，并取血清，-20℃凍存待檢。 肺組織勻漿的制備：將肺組織用冰生理鹽水沖洗，濾紙吸濕后，稱取濕重0.3

5、g左右，加入預(yù)冷的生理鹽水，用電動勻漿器研磨，鏡檢未見完整細胞，制成10％的肺組織勻漿。4℃6000r/min離心5min，提取上清液，用雙縮脲法測定蛋白含量，-20℃凍存待檢。 取右側(cè)肺臟中部組織0.5cmx0.5cm，用10％甲醛(pH7.4磷酸鹽緩沖液配制)固定，常規(guī)石蠟包埋，切片。 結(jié)果： 1 CB大鼠支氣管、肺組織病理形態(tài)學(xué)改變正常組可見細支氣管粘膜上皮完整，細胞排列整齊，細支氣管壁及肺泡無明顯病理形態(tài)

6、學(xué)改變(見Fig.1～3)。模型組可見細支氣管管腔增大，部分上皮細胞壞死脫落，周圍可見大量以淋巴細胞為主的慢性炎細胞浸潤。肺泡上皮細胞部分壞死脫落，肺泡間隔明顯增寬，伴有慢性炎細胞及少量剛t-性粒細胞浸潤等(見Fig.4～6)。 2 金水寶膠囊對CB大鼠血漿(清)和肺組織中ET-1和NO含罱的影響 2.1金水寶膠囊對CB大鼠血漿和肺組織中ET-1含量的影響結(jié)果顯示，與正常組比較，模型組大鼠血漿、肺組織中ET-l含量均明

7、顯升高(P<0.01)；與模型組比較，金高組、桂龍組血漿和肺組織中.ET-1含量均明顯降低(P<0.01)，金低組肺組織中ET-1含量也明顯降低(P<0.01)，而血漿中未見顯著性差異(P>0.05)；與金低組比較，金高組、桂龍組血漿和肺組織中.ET-1含量均明顯降低(P<0.05或P<0.01)：與金高組比較，桂龍組血漿中ET-1含量明顯降低(P<0.05)，肺組織中未見顯著性差異(p>0.05)。見Fable 1。 2.2

8、金水寶膠囊對CB大鼠血清和肺組織中NO含量的影響結(jié)果顯示，與正常組比較，模型組大鼠血清、肺組織中NO含量均明顯降低(P<0.01)；與模型組比較，金高組、桂龍組血清和肺組織中NO含量均升高(P<0.01)，金低組血清中NO含量也明顯升高(P0.05)；與金低組及桂龍組相比，金高組血清、肺組織中N0含量均有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。見Table 2。 3 CB大鼠

9、肺組織cNOS的表達特征及金水寶膠囊的作用機制正常組大鼠細支氣管粘膜上皮細胞胞漿cNOS呈較強的陽性表達(Fig.7、8)；模型組大鼠可見細支氣管粘膜上皮細胞胞漿存在較弱的cNOS陽性反應(yīng)信號，動脈管壁平滑肌細胞胞漿呈較強陽性表達(Fig.9、lO)。陽性信號均呈棕黃色。 金低組與桂龍組細支氣管粘膜上皮細胞胞漿呈現(xiàn)較弱的陽性反應(yīng)(Fig.11、12，15、16)；金高組cNOS表達呈現(xiàn)較強的陽性信號。與正常組相似，陽性反應(yīng)主要

10、見于細支氣管粘膜上皮細胞胞漿(Fig.13、14)。 結(jié)論： 1 CB狀態(tài)下，血液和肺組織中ET-1的明顯增多和NO合成的不足，共同導(dǎo)致了氣道的炎癥反應(yīng)和組織損傷。這種變化，對CB的形成和發(fā)展具有重要影響。 2 CB狀態(tài)下，cNOS在細支氣管粘膜上皮細胞的表達受到抑制，并使內(nèi)源性NO生成和釋放減少，從而促進支氣管收縮。 3 金水寶膠囊可通過有效抑制ET-1的產(chǎn)生，顯著提高NO含量，恢復(fù)肺血管、支氣管平