溫陽(yáng)中藥調(diào)控肺間質(zhì)纖維化大鼠肺膠原代謝失衡的作用及其機(jī)制.pdf

1、目的：隨著中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究的快速發(fā)展，為臨床上一些難以治愈的疑難病例帶來(lái)了極大的希望，如特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化，目前，還未有逆轉(zhuǎn)或延緩其病程進(jìn)展的有效手段。對(duì)腎陽(yáng)虛證的本質(zhì)，已有研究證實(shí)主要為下丘腦．垂體．靶腺軸(腎上腺、性腺、甲狀腺及胸腺)功能減退所致，這必然對(duì)機(jī)體的包括肺組織膠原代謝在內(nèi)的物質(zhì)代謝產(chǎn)生影響，而肺間質(zhì)纖維化則主要是肺組織以膠原為主的細(xì)胞外基質(zhì)代謝失衡而過(guò)度沉積所致，所以，我們復(fù)制了腎陽(yáng)虛肺纖維化和肺纖維化大鼠模型，同時(shí)，用

2、溫腎壯陽(yáng)藥(溫陽(yáng)藥)冬蟲(chóng)夏草(蟲(chóng)草)進(jìn)行干預(yù)，以明確腎陽(yáng)虛狀態(tài)下肺纖維化肺膠原代謝失衡的情況及其機(jī)制和蟲(chóng)草的調(diào)控作用，從而為進(jìn)一步在溫陽(yáng)藥中研究開(kāi)發(fā)抗肺纖維化的有效藥物提供理論依據(jù)。 研究?jī)?nèi)容： 1．腎陽(yáng)虛肺纖維化和肺纖維化大鼠模型的建立和鑒定。 2．利用組織芯片結(jié)合免疫組化、原位雜交等技術(shù)和實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)，觀察腎陽(yáng)虛狀態(tài)下肺纖維化肺膠原代謝失衡的情況和TGFβ<,1>及其信號(hào)通路分子mRNA表達(dá)的

3、改變。 3．觀察。腎陽(yáng)虛肺纖維化和肺纖維化大鼠肺組織GRmRNA的表達(dá)情況。 4．觀察溫陽(yáng)藥蟲(chóng)草對(duì)肺纖維化肺膠原代謝失衡的調(diào)控作用及其對(duì)肺組織TGF β<,1>、TGF β RII和smad4 mRNA表達(dá)的影響。 方法： 1．健康SD大鼠100只，按性別分層后隨機(jī)分為生理鹽水組(NS)、肺纖維化組(BLM)、腎陽(yáng)虛肺纖維化組(RYA)、蟲(chóng)草一組(CSl)及蟲(chóng)草二組(CS2)，每組再據(jù)14天及28天兩時(shí)

4、相分為兩亞組，每亞組雌雄各5只。 2．氣管內(nèi)一次性緩慢滴入博萊霉素復(fù)制肺纖維化組的肺纖維化大鼠模型，在肺纖維化模型操作的基礎(chǔ)上每天灌胃腺嘌呤使之產(chǎn)生腎陽(yáng)虛證，從而建立腎陽(yáng)虛肺纖維化組的腎陽(yáng)虛肺纖維化大鼠模型，蟲(chóng)草一組是在腎陽(yáng)虛肺纖維化形成的過(guò)程中給予蟲(chóng)草干預(yù)，而蟲(chóng)草二組是在肺纖維化形成的過(guò)程中給予蟲(chóng)草干預(yù)，所有動(dòng)物分別在第14天和第29天早上8-9點(diǎn)處死并取標(biāo)本。 3．血液標(biāo)本在離心后取血漿于超低溫冰箱-20℃保存，肺組

5、織于液氮罐中保存，另取肺腎組織于4[％]多聚甲醛中固定，后制成石蠟塊。 4．蠟塊制成組織芯片，然后結(jié)合HE染色、膠原染色、免疫組化及原位雜交技術(shù)，通過(guò)計(jì)算機(jī)圖象分析技術(shù)，量化肺組織炎癥及纖維化程度和I型膠原的含量，同時(shí)，定位定量肺組織GR、TGF βRII和smad4 mRNA的表達(dá)。 5．實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)肺組織TGFβ<,1>和I型膠原mRNA的表達(dá)。 結(jié)果： 1．腎陽(yáng)虛時(shí)肺組織總膠原

6、沉積減輕，而在同樣低代謝率水平上，I型膠原過(guò)度沉積卻加重，而溫陽(yáng)藥蟲(chóng)草能夠抑制。腎陽(yáng)虛時(shí)肺組織I型膠原過(guò)度沉積。 2．腎陽(yáng)虛狀態(tài)下，大鼠肺組織TGF-β<,1> mR N A表達(dá)下調(diào)，這與其肺組織總膠原過(guò)度沉積減輕是一致的，而蟲(chóng)草有逆轉(zhuǎn)肺組織TGF-β<,1>m RN A表達(dá)下調(diào)的趨勢(shì)，但二者比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但肺組織TGF-β R IIm R N A在腎陽(yáng)虛狀態(tài)下的表達(dá)卻較單純肺纖維化時(shí)明顯上調(diào)，而蟲(chóng)草有抑制其上調(diào)的作用。

7、 3．肺纖維化肺組織GRmRNA表達(dá)上調(diào)；而腎陽(yáng)虛狀態(tài)下肺纖維化肺組織GRmRNA表達(dá)則下調(diào)。 4．肺組織TGFβ<,1>及TGFβ<, 1>RII mRNA表達(dá)于肺纖維化組明顯上調(diào)，但腎陽(yáng)虛組TGF β<,1>mRNA表達(dá)下調(diào)，蟲(chóng)草有逆轉(zhuǎn)TGF β<,1>mRNA表達(dá)下調(diào)的趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，TGFβ<, 1>RII mRNA于腎陽(yáng)虛組則表達(dá)明顯上調(diào)，而蟲(chóng)草則明顯抑制其上調(diào)，并且，統(tǒng)計(jì)學(xué)比較有顯著性差異。 結(jié)

8、論： 1．腎陽(yáng)虛可通過(guò)降低機(jī)體代謝率而使肺纖維化肺總膠原沉積減輕，但卻加速I(mǎi)型膠原代謝失衡而過(guò)度沉積，從而加速肺纖維化進(jìn)展，其機(jī)制可能是通過(guò)上調(diào)肺組織TGF β<,1>RIImRNA的表達(dá)，從而使在低代謝水平上表達(dá)紊亂的TGF-β-smad<,s>通路上的信號(hào)分子呈上調(diào)優(yōu)勢(shì)而促使I型膠原的過(guò)度沉積。 2．肺纖維化時(shí)肺組織GRmRNA表達(dá)的上調(diào)是腎上腺糖皮質(zhì)激素之所以有效的機(jī)制之一，而腎陽(yáng)虛有抑制肺組織GRmRNA表達(dá)的

9、上調(diào)之作用，久病必虛，這也是中晚期肺纖維化患者對(duì)腎上腺糖皮質(zhì)激素療效差的原因之一。 3．溫腎壯陽(yáng)藥蟲(chóng)草在腎陽(yáng)虛低代謝狀態(tài)下通過(guò)下調(diào)肺組織TGF β<,1>RIImRNA的表達(dá)而有逆轉(zhuǎn)腎陽(yáng)虛所致的I型膠原過(guò)度沉積之作用，從而延緩病程進(jìn)展；同時(shí)，也可能通過(guò)上調(diào)腎陽(yáng)虛時(shí)GRmRNA的表達(dá)而調(diào)控肺膠原代謝失衡和增強(qiáng)糖皮質(zhì)激素的療效。 4．溫腎壯陽(yáng)藥蟲(chóng)草在肺纖維化非低代謝率水平時(shí)，也有抑制膠原尤其是I型膠原過(guò)度沉積之作用，其機(jī)制