黃芪、魚(yú)腥草、板藍(lán)根、香菇多糖體外刺激人肺腺上皮細(xì)胞β-防御素-2表達(dá)的研究.pdf

1、呼吸道感染一直是威脅人類生命的十大死因之一，尤其是下呼吸道感染對(duì)生命的威脅更為嚴(yán)重，肺部感染的嚴(yán)重程度也隨年齡的增長(zhǎng)而加重，預(yù)后差，致殘率及病死率高。引起呼吸道感染的病原體主要是細(xì)菌、病毒和非典型病原體，而且在下呼吸道感染中，病毒和非典型病原體起著越來(lái)越重要的作用。因此，正確、合理、有效的選用抗生素是目前治療呼吸道感染包括肺部感染的主要策略。但是隨著抗生素的廣泛使用，已經(jīng)導(dǎo)致耐藥菌株的不斷出現(xiàn)，并且蔓延。細(xì)菌感染對(duì)傳統(tǒng)抗生素的耐藥性是嚴(yán)

2、重的全球性問(wèn)題。而對(duì)于病毒感染，目前仍然沒(méi)有特效藥物。因此，尋找新的抗微生物藥物已經(jīng)十分迫切，其中防御素便成為廣大學(xué)者關(guān)注的熱點(diǎn)之一。 防御素是一種富含精氨酸的小分子量陽(yáng)離子抗菌肽，廣泛分布于哺乳動(dòng)物、昆蟲(chóng)和植物中，是先天性免疫系統(tǒng)的一部分，在宿主的天然防御機(jī)制中起著重要作用，主要包括α和β防御素兩大家族。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)六種人β防御素(human-β-defensin)：HBDl～6，其中人β-防御素-2(HBD-2)主要對(duì)革蘭陰

3、性菌(如綠膿桿菌、大腸桿菌等)、真菌(如白色念珠菌)和分枝桿菌具有殺滅作用。HBD-2在皮膚、肺和氣管中呈現(xiàn)固有表達(dá)，但在正常情況下其表達(dá)量很低，通過(guò)前炎癥因子，如脂多糖(LPS)、白介素-1β(IL-1β)和腫瘤壞死因子(TNF-α)刺激后其表達(dá)能顯著上調(diào)，而且其誘導(dǎo)性表達(dá)在其他組織中也可見(jiàn)。HBD-2是第一種被發(fā)現(xiàn)，通過(guò)微生物及前炎癥因子誘導(dǎo)能在轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)增加的人β防御素，但其被誘導(dǎo)表達(dá)的機(jī)制仍不十分清楚。 中

4、藥是我國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中的瑰寶，在古代醫(yī)學(xué)和現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中都發(fā)揮著重要的作用。目前有很多研究表明，黃芪、魚(yú)腥草、板藍(lán)根和香菇多糖均能刺激IL-1、IL-2和TNF-α等細(xì)胞因子的產(chǎn)生，使巨噬細(xì)胞作用增強(qiáng)，從而提高機(jī)體的免疫力，發(fā)揮抗感染和抗腫瘤作用。 目的：本研究目的旨在探討黃芪、魚(yú)腥草、板藍(lán)根和香菇多糖體外刺激人肺腺上皮細(xì)胞(SPC-A-1)，誘導(dǎo)表達(dá)HBD-2基因的情況。并進(jìn)一步研究該表達(dá)是否存在濃度和時(shí)間依賴性效應(yīng)，為進(jìn)一步在動(dòng)物水

5、平探討HBD-2的表達(dá)和中藥之間的劑量關(guān)系提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：實(shí)驗(yàn)組設(shè)置黃芪、魚(yú)腥草、板藍(lán)根和香菇多糖各5個(gè)濃度梯度：12.5、25.0、50.0、100.0及200.0ug／ml；設(shè)置IL-1β20ng／ml陽(yáng)性對(duì)照組和空白對(duì)照組各一個(gè)。分別刺激貼壁生長(zhǎng)的SPC-A-1，8小時(shí)后提取細(xì)胞總RNA，用一步法RT-PCR試劑盒對(duì)提取的細(xì)胞總：RNA進(jìn)行RT-PCR，得到特異性產(chǎn)物后，采用瓊脂糖凝膠電泳。不同濃度刺激下誘導(dǎo)的HBD

6、-2mRNA相對(duì)表達(dá)量用HBD-2的校正光密度值與人β-actin的校正光密度值比表示，從而獲得誘導(dǎo)HBD-2表達(dá)的四種最佳中藥濃度。然后以誘導(dǎo)HBD-2表達(dá)的最佳藥物濃度在不同的時(shí)間點(diǎn)：Oh、1h、2h、4h、8h、16h、24h及48h刺激SPC-A-1細(xì)胞，提取細(xì)胞總RNA、做R-T-PCR、瓊脂糖電泳，并分析結(jié)果。 結(jié)果：黃芪、魚(yú)腥草、板藍(lán)根和香菇多糖刺激SPC-A-1細(xì)胞8小時(shí)后，HBD-2mRNA表達(dá)最高的濃度均為1

7、00ug／ml。用最高表達(dá)濃度100ug／ml的四種中藥，分別于不同時(shí)間點(diǎn)刺激SPC-A-1細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)HBD-2mRNA表達(dá)最高發(fā)生于8小時(shí)后。 結(jié)論：本研究應(yīng)用RT-PCR技術(shù)首次證實(shí)黃芪、魚(yú)腥草、板藍(lán)根和香菇多糖可以上調(diào)人肺腺上皮細(xì)胞(SPC-A-1)HBD-2mRNA的表達(dá)；這種增強(qiáng)表達(dá)與藥物的刺激劑量和刺激時(shí)間具有一定的相關(guān)性，從而證實(shí)HBD-2可以被誘導(dǎo)表達(dá)增強(qiáng)。說(shuō)明黃芪、魚(yú)腥草、板藍(lán)根和香菇多糖等四種中藥的抗感染和免