鐘花櫻離體繁殖技術(shù)體系研究.pdf

1、鐘花櫻具有冠型美，色彩艷麗，花期長(zhǎng)等特點(diǎn)，是優(yōu)良的園林觀賞樹(shù)種，但是鐘花櫻自身結(jié)實(shí)量少，采種期短，采種困難，且扦插繁殖以嫩枝扦插為主，受限制較多，致使鐘花櫻可用資源極少，處于漸危狀態(tài)。本研究對(duì)鐘花櫻離體繁殖技術(shù)體系進(jìn)行了探索，分別對(duì)外植體的表面滅菌、啟動(dòng)培養(yǎng)、繼代增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)以及煉苗移栽等方面進(jìn)行了研究，著重探討了組織培養(yǎng)過(guò)程中最佳培養(yǎng)基配方及培養(yǎng)程序，為以后鐘花櫻的遺傳轉(zhuǎn)化及品種改良等研究奠定技術(shù)基礎(chǔ)，并為鐘花櫻的組培快繁提供了

2、技術(shù)理論依據(jù)，具有重要的經(jīng)濟(jì)和科學(xué)價(jià)值。主要研究結(jié)果如下： 1.鐘花櫻不同外植體材料消毒的難易程度相差較大。頂芽消毒最易，葉消毒最難，莖段的消毒效果居中。項(xiàng)芽的消毒以70％酒精處理30-45s后，再以0.1％HgCl2溶液滅菌5min的處理效果最好，存活率達(dá)74.2％；莖段滅菌以70％酒精處理1min后，再以0.1％HgCl2溶液滅菌7min的處理效果最好，存活率達(dá)65.5％；葉的滅菌較為困難，消毒效果最好的為70％酒精處理30

3、-45s后，再以0.1％HgCl2溶液滅菌8min的處理，但其污染率也高達(dá)60.7％，存活率僅為14.3％。 2.啟動(dòng)培養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果表明：(1)在附加不同濃度NAA的MS培養(yǎng)基上，鐘花櫻嫩枝均可誘導(dǎo)愈傷組織分化，但未能誘導(dǎo)出芽。NAA濃度對(duì)外植體啟動(dòng)速度有極顯著影響，當(dāng)NAA濃度為0.1mg·L-1時(shí)，外植體啟動(dòng)速度最快，平均啟動(dòng)速度為10.71d。(2)以MS為基本培養(yǎng)基，6-BA濃度0.1-5.0mg·L-1均可誘導(dǎo)愈傷組織分

4、化和芽體分化。6-BA濃度對(duì)鐘花櫻嫩枝的啟動(dòng)培養(yǎng)速度、愈傷組織分化率和芽誘導(dǎo)率均有極顯著影響。當(dāng)6-BA濃度為5.0mg·L-1時(shí)，外植體啟動(dòng)速度最快，平均啟動(dòng)速度僅為11.07d；愈傷組織分化率也最大，為89.47％；當(dāng)6-BA濃度為4.0mg·L-1時(shí)，芽誘導(dǎo)率達(dá)到最大，為52.60％。(3)在附加不同濃度6-BA、NAA的MS、改良WH、改良MS培養(yǎng)基上，各處理均有不同程度的愈傷組織形成。統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果表明：基本培養(yǎng)基對(duì)愈傷組織分化

5、率影響顯著，6-BA濃度對(duì)愈傷組織分化率影響極顯著，NAA濃度對(duì)愈傷組織分化率無(wú)顯著影響；基本培養(yǎng)基和6-BA濃度對(duì)芽誘導(dǎo)率和平均芽數(shù)量均有顯著性的影響。適合鐘花櫻嫩枝啟動(dòng)培養(yǎng)的培養(yǎng)基組合為：MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA 0.1mg·L-1，愈傷組織分化率較低，為38.89％；芽誘導(dǎo)率和平均芽數(shù)量均最大，分別為94.44％、3.78。 3.在增殖培養(yǎng)試驗(yàn)中，6-BA濃度對(duì)增殖系數(shù)有極顯著影響，NAA濃度對(duì)增殖系數(shù)有顯

6、著影響。6-BA、NAA、蔗糖三者對(duì)鐘花櫻增殖培養(yǎng)效果影響的主次關(guān)系為：6-BA>NAA>蔗糖。MS+6-BA3.0mg·L-1+NAA 0.01mg·L-1+蔗糖30g·L-1組合，增殖系數(shù)最高達(dá)7.44。 4.MS+NAA 0.1 mg·L-1+GA3 0.3mg·L-1較有利于壯苗培養(yǎng)。經(jīng)過(guò)壯苗培養(yǎng)，芽長(zhǎng)勢(shì)好，木質(zhì)化程度高，有利于提高生根率和移栽成活率。MS+NAA 0.1 mg·L-1+GA3 0.3mg·L-1較有利于

7、壯苗培養(yǎng)。 5.生根培養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果表明：(1)基本培養(yǎng)基、IBA和IAA三者對(duì)生根率的影響的主次關(guān)系為：IBA>IAA>基本培養(yǎng)基?；九囵B(yǎng)基、IBA濃度、IAA濃度對(duì)生根率均有極顯著性影響。處理：1/2 MS+IBA 1.0mg·L-1+IAA0.5mg·L-1+蔗糖20g·L-1的生根率最高，達(dá)82.35％，且植株長(zhǎng)勢(shì)好，生根快，根長(zhǎng)3-4cm。(2)ABT1、ABT3各濃度均可誘導(dǎo)生根，以處理：1/2 MS十ABT11.5m