胚鼠腹側中腦組織聯合胚腎組織腦內移植治療帕金森病的實驗研究.pdf

1、目的:為提高移植的多巴胺能神經元的存活率和促進細胞生長,將胚鼠腹側中腦組織(VM)和胚腎組織聯合移植入PD大鼠腦內,觀察其療效,檢測胚腎組織對移植DA細胞的作用,從而為PD臨床治療提供一定的實驗依據.方法:該實驗用神經毒劑6-OHDA單側損毀SD大鼠左側中腦被蓋腹側區(qū)(VTA)和黑質致密部(SNC)建立動物模型.取損毀后4周阿樸嗎啡(APO)誘導健側旋轉210圈/30分鐘的成功PD模型46只隨機分為兩個實驗組:實驗組 1:檢測移植多巴胺

2、能神經元的存活率,取孕14天胚鼠腹側中腦組織和孕18天的胚鼠腎臟組織,分為VM1組(將VM組織預置于胚腎組織營養(yǎng)液中;N=6)和VM2組(將VM組織預置于DMEM營養(yǎng)液中;N=6),預置6小時后,將VM組織制成細胞懸液,用微量注射器立體定向植入PD大鼠毀損側尾殼核,于移植后1天處死,進行TUNEL、TH染色和流式細胞儀檢測.實驗組 2:檢測移植多巴胺能神經元的生長情況,分為VM單獨移植組(N=12);VM和胚腎組織聯合移植組(N=12)

3、;空白對照組(N=10).取孕14天胚鼠腹側中腦組織和孕18天胚鼠腎臟組織,分別制成細胞懸液和組織塊,用微量注射器立體定向植入PD大鼠毀損側尾殼核,空白對照組不移植.動物分別存活3、6個月,存活期間每兩周APO腹腔注射觀察動物旋轉行為變化并記錄.所有動物均用4％多聚甲醛灌注取腦,分別進行TH和HE染色.結果:根據TUNEL、TH染色和流式細胞儀檢測結果,VM1移植組較VM2移植組移植神經元凋亡率降低,凋亡細胞數減少,THir陽性神經元數

4、量明顯增多,證明胚腎組織確實具有營養(yǎng)作用,可明顯提高移植后多巴胺能神經元的存活率.移植后3、6個月內,聯合移植組和單獨移植組大鼠旋轉行為均較正常對照組減少,經統(tǒng)計學處理P<0.05.免疫組化和組織學觀察聯合移植組和單獨移植組移植針道和針道周圍都可見THir陽性細胞及THir陽性纖維,前者無論是細胞數量、細胞體積和纖維密度均大于或高于后者.結論:1、胚腎組織具有明顯的營養(yǎng)作用.2、胚腎組織能夠明顯減少移植神經元凋亡,促進移植神經元的存活.