高壓靜電場處理花粉對(duì)白蠟屬種間雜交的影響.pdf

1、本論文利用高壓靜電場處理白蠟屬樹種的花粉，通過提高花粉生命力促進(jìn)白蠟屬種翻雜交親和性和雜種生活力。為了揭示其分子機(jī)理，以經(jīng)高壓靜電場處理和對(duì)照的水曲柳花粉為研究對(duì)象，利用mRNA差異顯示(DDRT-PCR)和Reverse Northern雜交技術(shù)獲得差異表達(dá)片段，并對(duì)基因片段進(jìn)行測序和序列分析。所得結(jié)果如下： 1、白蠟屬樹種花粉萌發(fā)的比較適合培養(yǎng)基為：蔗糖10g·L<'-1>+瓊脂1g·L<'-1>+尿素0.1g·L<'-1>

2、+硼酸1g·L<'-1>+硝酸鉀0.1g·L<'-1>+硫酸鎂0.2g·L<'-1>+硝酸鈣0．1g．L-I+硫酸鋅0.1mg/L+鉬酸鈉20 mg/L+NAA10mg/L+6-BA1mg/L，pH6.5。 2、本試驗(yàn)測定株間花粉生活力最高相差30.9％，說明白蠟屬株間花粉生命力差異明顯。 3、將花粉4℃密封保存有利于保持花粉的生命力。 4、經(jīng)適宜的高壓靜電場處理，水曲柳的花粉萌發(fā)率可比對(duì)照高出19.7％。

3、 5、經(jīng)適宜場強(qiáng)處理的白蠟屬花粉與水曲柳雌株雜交，座果率明顯提高，最多提高13.5％。 6、大葉白蠟、小葉白蠟和絨毛白蠟花粉經(jīng)高壓靜電場處理后雜交得到的種子在種長、種寬、千粒重三方面幾乎都高于未處理得到的雜交種子。種長差別最大的品種前者比后者高出0.25cm(9.40％)；種寬差別最大的品種前者比后者高出0.06cm(9.84％)；千粒重差別最大的品種前者比后者高出13.71g(25.90％)。 7、經(jīng)高壓靜電場處理花

4、粉后得到的雜交苗在苗高、地莖、光和速率、葉綠素含量方面都明顯高于對(duì)照苗。 8、改良的CTAB法是提取水曲柳花粉總RNA的有效方法。 9、水曲柳花粉經(jīng)高壓靜電場處理后有特異基因表達(dá)。通過Reverse Northern斑點(diǎn)雜交的檢測鑒定，共獲得6個(gè)差異基因片段。通過序列測定及分析，發(fā)現(xiàn)6個(gè)基因片段分別與擬南芥的核苷控制的離子通道基因、番茄葉綠體的銅鋅超氧化物歧化酶(SOD)基因、番茄葉綠體的銅鋅超氧化物歧化酶(SOD)基因