2型糖尿病大鼠脂聯(lián)素受體mRNA表達及其與糖脂代謝關系的研究.pdf

1、目的：本研究采用高脂飼料結合小劑量鏈脲佐菌素(streptozotocin，STZ)一次性腹腔注射誘導正常SD(Sprague-Dawley)大鼠發(fā)生2型糖尿病(T2DM)，制造一種符合人類T2DM發(fā)病特點的動物模型，并采用逆轉錄聚合酶鏈反應(reversetranscriptionpolymerasechainreaction，RT-PCR)的方法檢測實驗組大鼠骨骼肌組織脂聯(lián)素受體1(AdipoR1)和肝臟組織脂聯(lián)素受體2(Adipo

2、R2)mRNA表達水平，同時檢測大鼠血脂、血糖、胰島素、脂聯(lián)素等糖、脂代謝相關指標，然后進行綜合分析，旨在探討T2DM狀態(tài)下影響AdipoRmRNA表達的因素及其與胰島素抵抗(insulinresistance，IR)的關系，闡述AdipoR基因表達與IR相互作用的可能機理，進而了解其與T2DM發(fā)病的關系。 方法：健康清潔級近交系SD雄性大鼠20只，體重200～250g，按完全隨機法分為2組，即對照組(NC組)、2型糖尿病組(D

3、M組)，每組10只。NC組為正常飼料喂養(yǎng)組，DM組為高脂飼料喂養(yǎng)12周后再給予小劑量STZ(25mg/kg)一次性腹腔注射建立T2DM動物模型。大鼠在適應性喂養(yǎng)1周后，用相應的飼料喂養(yǎng)至第12周末，眶靜脈取血留取血清標本檢測甘油三酯(TG)、膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-c)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-c)、空腹血糖(FBG)、空腹胰島素(FINS)和脂聯(lián)素(APN)水平。于第13周末將所有大鼠禁食10～12h后，DM組

4、大鼠一次性腹腔注射無菌STZ(25mg/kg，溶于pH=4.4、0.1M無菌檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液)造模，NC組腹腔注射相應體積的上述檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液。第14周末進行口服葡萄糖耐量試驗(OralGlucoseToleranceTest，OGTT)篩選T2DM大鼠。兩組大鼠繼續(xù)相應飼料喂養(yǎng)，至第25周末處死所有大鼠，心臟取血留取血清標本，分離肝右葉和右后肢股四頭肌組織，用RT-PCR方法檢測骨骼肌組織AdipoR1mRNA和肝臟組織

5、AdipoR2mRNA表達水平。試驗期間監(jiān)測大鼠體重，觀察大鼠進食、飲水、排尿和活動情況。 結果：1.試驗第12周時DM組血清TG、FINS和LDL-c水平已顯著升高，APN和HDL-c低于NC組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。FBG和TC水平在兩組中無顯著性差別(P＞0.05)。同時根據(jù)所測FBG和FINS水平計算胰島素敏感性指數(shù)(ISI)評價胰島素抵抗程度，即可發(fā)現(xiàn)高脂喂養(yǎng)的SD大鼠其ISI水平顯著低于正常飼料喂養(yǎng)的大

6、鼠，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。 2.模型組大鼠經(jīng)高脂飼料喂養(yǎng)加小劑量STZ一次性腹腔注射后血糖升高，用OGTT檢測0h，0.5h，1h，2h四個時點血糖，達到大鼠糖尿病診斷標準，且血糖至實驗結束前始終維持在高水平。NC組大鼠四個時點血糖值均未達到大鼠糖尿病診斷標準。 3.造模前兩組大鼠體重均顯著增加，但模型組大鼠體重增加更明顯，與NC組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。造模后，模型組體重逐漸減輕，并出現(xiàn)明顯

7、的多飲、多尿和多食。至試驗結束時，DM組血中FBG、TG、TC、FINS和LDL-c繼續(xù)升高并高于NC組，但DM組血清APN和HDL-c繼續(xù)降低并低于NC組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。DM組ISI顯著低于NC組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。血中TC的升高與TG不同步。 4.骨骼肌和肝臟組織中AdipoR的RT-PCR結果顯示，DM組骨骼肌AdipoR1mRNA的水平顯著低于NC組，DM組肝臟組織AdipoR2m

8、RNA低于NC組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。 5.AdipoR1mRNA和AdipoR2mRNA的表達水平呈正相關，并且各自與ISI、APN、HDL-c正相關，與FBG、TC、TG、LDL-c、FINS負相關。 結論：1.通過高脂喂養(yǎng)結合小劑量STZ一次性腹腔注射能夠在沒有糖尿病遺傳背景的正常SD大鼠中復制出符合人類T2DM發(fā)病特點的動物模型。 2.T2DM狀態(tài)下，AdipoRmRNA表達減少伴有血糖、血