2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、MADS-box家族基因是一類編碼轉(zhuǎn)錄因子的基因,在植物生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中起重要的作用。如在植物根的營(yíng)養(yǎng)吸收、春化、開(kāi)花時(shí)間、分生組織分化、胚的發(fā)育及果實(shí)成熟等方面起著作用。近年來(lái)已發(fā)現(xiàn)MADS-box基因在植物花色素苷合成、抗逆性、根結(jié)構(gòu)、芽的休眠、甚至葉片的發(fā)育方面都發(fā)揮著重要作用。本論文克隆黃瓜的CsMADSs(CsMADS08、CsMADS21)基因,研究其在煙草細(xì)胞中的定位情況,構(gòu)建過(guò)表達(dá)載體,農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化擬南芥,分子檢測(cè)及篩選

2、獲得轉(zhuǎn)基因植株,對(duì)轉(zhuǎn)基因后代進(jìn)行GUS染色及表型變化分析,同時(shí)檢測(cè)CsMADSs基因在轉(zhuǎn)基因植株中的表達(dá)情況,結(jié)果如下:
  1、pCAMBIA1305-CsMADSs過(guò)表達(dá)載體的構(gòu)建。BamH I-Sal I雙酶切pMD19-T-CsMADSs質(zhì)粒,Sal I-BglⅡ雙酶切pCAMBIA1305植物表達(dá)載體。T4連接酶連接并轉(zhuǎn)化大腸桿菌JM109,經(jīng)PCR檢測(cè)和測(cè)序驗(yàn)證獲得重組質(zhì)粒pCAMBIA1305-CsMADSs。

3、>  2、CsMADSs的亞細(xì)胞定位。重組質(zhì)粒pCAMBIA1305-CsMADSs凍融法轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌,取2ml處理液注射煙草幼嫩葉片,注射后36-48h,熒光共聚焦顯微鏡觀察CsMADS08、CsMADS21在煙草中的瞬時(shí)表達(dá)情況,結(jié)果表明,CsMADS08定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞核上,而CsMADS21定位于細(xì)胞膜上。
  3、轉(zhuǎn)基因后代表型變化分析。采用花序浸染法將過(guò)表達(dá)載體的農(nóng)桿菌菌液轉(zhuǎn)化擬南芥,潮霉素篩選和PCR驗(yàn)證獲得陽(yáng)性植株

4、,觀察轉(zhuǎn)基因后代植株各器官的生長(zhǎng)發(fā)育情況。結(jié)果表明,過(guò)表達(dá)植株均出現(xiàn)葉片發(fā)紫現(xiàn)象;過(guò)表達(dá)CsMADS08植株,株型較矮,蓮座葉側(cè)枝減少,且出現(xiàn)大量的莖生葉,果莢數(shù)減少;在T4代出現(xiàn)了表型分離,一部分出現(xiàn)前面的表型,另一部分植株分枝數(shù)增加,果莢數(shù)多。而過(guò)表達(dá)CsMADS21植株,蓮座葉側(cè)枝及莖生葉側(cè)枝都增加,花期提前一周,果莢數(shù)多且飽滿,成熟期提早。
  4、過(guò)表達(dá)植株的GUS染色。對(duì)過(guò)表達(dá)CsMADS08及CsMADS21植株各器

5、官進(jìn)行GUS染色,結(jié)果表明,過(guò)表達(dá)CsMADS08植株的根被染色,而過(guò)表達(dá)CsMADS21植株的根、莖、花、葉、果莢均被染色。
  5、過(guò)表達(dá)植株的花青素含量變化。提取過(guò)表達(dá)植株及野生型植株葉片的花青素,結(jié)果顯示過(guò)表達(dá)植株葉片的花青素含量都比野生型高,達(dá)到顯著差異。
  6、實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)目的基因的表達(dá)量。提取T3代植株各器官總RNA,實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)CsMADSs基因的表達(dá)情況,結(jié)果顯示,過(guò)表達(dá)CsMADS08植株

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