自身免疫性骨髓衰竭癥患者淋巴細(xì)胞和CD34+細(xì)胞端粒長(zhǎng)度研究.pdf

1、自身免疫性疾病(Autoimmune disease，AID)是一組由大量的自身抗體和自身反應(yīng)性T細(xì)胞引起的自身免疫性疾病，其具體發(fā)病機(jī)制目前尚未明確，但T細(xì)胞啟動(dòng)或介導(dǎo)的自身免疫異常仍是其發(fā)病的中心環(huán)節(jié)。端粒(Telomere)是線性染色體末端的特殊結(jié)構(gòu)，功能是提供非轉(zhuǎn)錄DNA的緩沖物、阻止染色體DNA降解、末端融合、斷裂和重組，保護(hù)結(jié)構(gòu)基因的完整，調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)，且與細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)化、永生密切相關(guān)，其長(zhǎng)度決定了細(xì)胞的生命周期，人類非癌性

2、細(xì)胞，在其增殖分化過(guò)程中，均不能阻止端粒的縮短。近年研究發(fā)現(xiàn)，在自身免疫性疾病中，存在細(xì)胞端粒長(zhǎng)度的異?？s短。自身免疫性骨髓衰竭癥，是一類獲得性，由免疫因素介導(dǎo)的骨髓有核細(xì)胞增生低下，全血細(xì)胞減少性疾病，表現(xiàn)為貧血、出血和感染，包括以體液免疫功能亢進(jìn)為主的自身抗體介導(dǎo)的免疫相關(guān)性全血細(xì)胞減少癥及以細(xì)胞免疫功能亢進(jìn)為主的再生障礙性貧血。故本課題組主要包括了以下兩個(gè)方面的研究?jī)?nèi)容:
　　第一部分免疫相關(guān)性全血細(xì)胞減少癥患者淋巴細(xì)胞和C

3、D34+細(xì)胞端粒長(zhǎng)度研究
　　目的:檢測(cè)免疫相關(guān)性全血細(xì)胞減少癥（immuno-related pancytopenia，IRP）患者外周血CD3+T、CD3+CD4+T、CD3+CD8+T、CD19+B淋巴細(xì)胞及骨髓CD34+細(xì)胞端粒長(zhǎng)度變化并且分析其與病情的相關(guān)性，探討其在IRP免疫發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　方法:研究對(duì)象為40例初治IRP患者，以38名同種族、同地區(qū)、性別、年齡階段相似的健康志愿者作為正常對(duì)照組，應(yīng)用免疫

4、磁珠方法分選外周血CD3+T、CD3+CD4+T、CD3+CD8+T、CD19+B及骨髓CD34+細(xì)胞，以流式細(xì)胞術(shù)-熒光原位雜交技術(shù)(FLOW-FISH)檢測(cè)端粒相對(duì)長(zhǎng)度。
　　結(jié)果:
　　1、初治IRP患者外周血CD3+T、CD3+CD4+T、CD3+CD8+T細(xì)胞端粒相對(duì)長(zhǎng)度分別為(27.7544±16.3229)％、(7.5257±3.7453)％、(25.8543±14.7887)％，與健康志愿者[(54.5549

5、±19.7822)％、(12.0958±2.8048)％、(38.3670±4.6257)％]比較明顯縮短(P＜0.05); IRP患者外周血CD19+B淋巴細(xì)胞端粒相對(duì)長(zhǎng)度為(22.1360±16.1415)％，與健康志愿者(42.8457±16.3533)％比較顯著縮短(P＜0.01); IRP患者骨髓CD34+細(xì)胞端粒相對(duì)長(zhǎng)度為(22.5284±21,6009)％,與健康志愿者(23.9364±19.8224)％比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意

6、義(P＞0.05)。
　　2、B淋巴細(xì)胞端粒相對(duì)長(zhǎng)度與外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)呈正相關(guān)(r=0.706，P=0.015)，而與疾病的嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)(r=-0.613，P=0.045)，與治療效果呈正相關(guān)(r=0.775,P=0.005)。
　　結(jié)論:初治IRP患者存在CD3+T、CD3+CD4+T、CD3+CD8+T、CD19+B細(xì)胞端粒長(zhǎng)度的縮短，且與IRP患者的白細(xì)胞計(jì)數(shù)、疾病嚴(yán)重程度及治療效果密切相關(guān)，骨髓CD34+細(xì)胞端粒

7、長(zhǎng)度無(wú)明顯異常，提示端粒長(zhǎng)度的變化在IRP的免疫發(fā)病機(jī)制中可能發(fā)揮了重要作用，且進(jìn)一步證實(shí)了IRP為一種后天獲得性自身免疫性疾病，而非先天性克隆性疾病。這種端粒長(zhǎng)度的異常，為探索臨床治療靶點(diǎn)及尋找新的預(yù)防及治療方案提供了線索。
　　第二部分重型再生障礙性貧血患者淋巴細(xì)胞和CD34+細(xì)胞端粒長(zhǎng)度研究
　　目的:檢測(cè)重型再生障礙性貧血(Severe aplastic anemia，SAA)患者外周血CD3+、CD3+CD4+、C

8、D3+CD8+、CD19+淋巴細(xì)胞及骨髓CD34+細(xì)胞端粒長(zhǎng)度的變化在重型再生障礙性貧血(SAA)發(fā)病機(jī)制中的作用及分析其與病情的相關(guān)性。
　　方法:選取29例初治SAA患者為研究對(duì)象，以32名同種族、同地區(qū)、性別、年齡階段相似的健康志愿者為對(duì)照，應(yīng)用免疫磁珠方法分選外周血CD3+T、CD3+CD4+T、CD3+CD8+T、CD19+B淋巴細(xì)胞及骨髓CD34+細(xì)胞，以流式細(xì)胞術(shù)-熒光原位雜交技術(shù)(FLOW-FISH)檢測(cè)端粒相對(duì)長(zhǎng)

9、度。
　　結(jié)果:
　　1、初治SAA患者外周血CD3+T、CD3+CD4+T、CD3+CD8+T細(xì)胞端粒相對(duì)長(zhǎng)度分別為(21.0376±15.3885)％、(8.2019±2.7142)％、(16.0670±11.7219)，與健康志愿者比較[(54.5549±19.7822)％、(13.6251±1.5533)(38.7257±2.8303)％]，明顯縮短(P＜0.01);初治SAA患者外周血CD19+B淋巴細(xì)胞端粒相對(duì)長(zhǎng)

10、度為(40.6227±16.3068)％，與健康志愿者(42.8457±16.3533)％比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);初治SAA患者骨髓CD34+細(xì)胞端粒相對(duì)長(zhǎng)度為(25.6248±19.8564)％，與健康志愿者(23.9364±19.8224)％比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　2、CD3+CD8+T細(xì)胞端粒相對(duì)長(zhǎng)度與臨床表現(xiàn)嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)(r=-0.791，P=0.034)，而與白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白水平、血